【摘 要】
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利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,hTF),并进行纯化及复性研究.构建插入目的基因的pET28a(+)-hTF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,江苏南京210002;中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009;南京军区军事医学研究所,江苏南京,210002;南京医科大学基础医学院,江苏南京210005
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利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,hTF),并进行纯化及复性研究.构建插入目的基因的pET28a(+)-hTF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导其表达,菌体经超声裂解、离心收集包涵体,用8 mol/L尿素溶解包涵体、Ni-NTA纯化,采用透析复性和柱上复性两种方式获得复性的重组人HTF.柱上复性和透析复性均获得具有生物活性的重组人hTF,但柱上复性的复性率为72％,明显高于透析复性的复性率16％.成功构建高表达人重组hTF的工程菌,通过柱上复性获得高纯度具有生物活性的重组人hTF蛋白,为hTF的研究奠定了基础.
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