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[摘要] 目的 对盐酸吉西他滨中的残留溶剂进行测定。方法 采用顶空气相色谱法，DB-WAX石英毛细管柱（30 mm×0.53 mm，1.0μm），进样口温度为150℃；氢火焰离子化检测器，载气为氮气，检测器温度为240℃，柱初温40℃维持7 min，以10℃/min升温速率升至120℃。结果 被测溶剂均能得到很好的分离，每一个溶剂的峰面积与浓度在一定的范围内均呈良好的线性关系。结论 该方法作为盐酸吉西他滨中残留溶剂的检测是准确、可靠的。
[关键词] 盐酸吉西他滨；气相色谱；残留溶剂
[中图分类号] R927.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2012）05-95-02
Determination of residual solvents in gemcitabine hydrochloride
LI Xiaobi1 WANG Chunling2
Jiangsu Hansoh Medicine Research Institute Co., Ltd., Lianyungang 222000, China
[Abstract] Objective To establish a method for detection of residual solvents in gemcitabine hydrochloride. Methods The residual solvents in gemcitabine hydrochloride was determined by headspace GC with DB-WAX capillary column（30 mm×0.53 mm，1μm） with FID detector and nitrogen as the carries gas. The injector temperature was 150℃， the detector temperature was 240℃， the column temperature rosed by program， the initial temperature was 40℃ and maintained for 7 min，rosed to 120℃ with a rate of 10℃/min. Results The solvents could be completely separated， and the calibration curves of each solvent had good linear relationship within a certain range. Conclusion The method is proved accurate and reliable， it can be used for the determination of residual solvents in gemcitabine hydrochloride.
[Key words] Gemcitabine; Hydrochloride; GC; Residual solvents
盐酸吉西他滨（gemcitabine hydrochloride）化学名2-脱氧-2，2-盐酸二氟脱氧胞苷（β-异构体），是一种阿糖胞苷类似物，属于新型抗嘧啶核苷酸代谢化疗药物，属细胞周期特异性抗代谢类药物，主要作用于DNA合成期的肿瘤细胞，即S期细胞。在过去的临床工作中，笔者观察到盐酸吉西他滨是疗效较好而毒副反应较少的化疗药物之一[1-2]。残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂[3]，根据ICH原则和中国药典二部附录相关指导原则[4-5]要求，现将本品的合成工艺中存在的甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇的残留量进行测定。由于本品溶于水而不溶于二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺，因此本分析方法将以水为溶剂，采用顶空气相色谱法[6-7]进行测定。
1 仪器与试剂
仪器：电子分析天平，梅特勒XS105，Agilent 7890 GC气相色谱仪，顶空进样器 G1888，安捷伦色谱工作站；色谱柱：DB-WAX（30 mm×0.53 mm×1.0μm）。试剂：甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇均为分析纯，来自国药集团化学试剂股份有限公司。
2 试验过程与结果
2.1 色谱条件
照残留溶剂测定法（中国药典2010年版二部附录Ⅷ P第二法），以DB-WAX毛细管色谱柱，氢火焰离子化（FID）检测器，检测器温度240℃；进样口温度150℃；柱初温40℃维持7 min，以10℃/min升温速率升至120℃；顶空瓶平衡温度95℃，平衡时间30 min；进样体积1 mL，分流比1∶10；取样针温度为100℃；传输线温度为110℃。
2.2 试验溶液配制
取本品约100 mg精密称定，置顶空瓶中，精密加入水5 mL、无水硫酸钠2 g，密封，作为供试品溶液；另取丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯适量，精密称定，用水制成每毫升中含丙酮100μg、乙酸乙酯100μg、甲醇60μg、异丙醇100μg、甲苯17.8μg的溶液，作为系统适用性溶液。
2.3 系统专属性试验
量取系统适用性溶液5 mL置顶空瓶中，注入气相色谱仪，记录图谱，有实验看出，各峰最小分离度为2.5，表明本分析方法专属性强。见图1。
图1 系统适用性
2.4 定量限与检测限
精密称取甲醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯适量，置量瓶中，用水溶解制成储备液。逐步稀释储备液，精密移取上述溶液各5 mL分别置入顶空瓶中，并分别加入2 g无水硫酸钠，扎盖密闭，置入顶空进样器中。进样至信噪比（峰高/基线噪声）（3±1）为检测限、信噪比（10±2）为定量限。见表1。
2.5 线性关系试验
按照标准限度浓度配制线性关系试验溶液，丙酮在0.057 8～124μg/mL、乙酸乙酯在0.048 0～121μg/mL、甲醇在0.564～72.2μg/mL、异丙醇在0.138～124μg/mL、甲苯在0.021 8～21.4μg/mL，测定结果线性相关系数皆＞0.999，说明线性良好，线性方程及相关系数见表2。
2.6 系统精密度
精密称取丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯适量，用水稀释定容，配成浓度分别为101.0、103.0、60.8、103.0、17.8μg/mL的溶液，作为对照品溶液。精密移取对照品5 mL置顶空瓶中，加入2 g无水硫酸钠，扎盖密闭，制取6份备用。将上述溶液置入顶空进样器中，连续6次进样对照品溶液。实验结果见表3。
由表3可见，上述6份溶液中5个溶剂的峰面积的最大RSD为5.62%，小于10.0%的要求，说明系统的精密度符合要求。
2.7 回收率
精密称取丙酮100.2 mg、乙酸乙酯104.0 mg、甲醇62.7 mg、异丙醇101.5 mg、甲苯17.4 mg置100 mL量瓶中，用水稀释定容，作为储备液。取供试品约100 mg，置顶空瓶中精密称定，共称9份，用储备液进行配置成限量10%、100%、120%的测试液，置入顶空进样器中，定量测定的5个溶剂的平均回收率介于95％～110％之间，各溶剂回收率的最大相对标准偏差RSD为9.57%，表明本方法的准确性较好。
3 讨论
采用顶空气相色谱法测定盐酸吉西他滨中残留的丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯，专属性好。对检测限、定量限的测定，说明该方法具有较高的灵敏度，能保证对低限度的溶剂的准确测定，另外对线性关系、系统精密度、回收率的测定，充分说明该方法测定样品中残留的几种溶剂的线性与范围良好、准确度好，能对样品中的残留溶剂进行很好的控制。
[参考文献]
[1] 李留树， 王如良. 非小细胞肺癌的治疗进展[J]. 解放军保健医学杂志， 2011， 13（3）：199-200.
[2] 陈新谦， 金有豫， 汤光，等. 新编药物学[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2004：675.
[3] 国家食品药品监督管理局. 化学药物残留溶剂的研究技术指导原则//药品研究技术指导原则[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2010：10，50.
[4] 周海均. 药品注册的国际技术要求·质量部分[M]. 北京：人民卫生出版社， 2000：35-38.
[5] 张数秀， 曹志胜， 惠秋莎，等. 最新药品注册工作指南[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2007：18，100.
[6] 国家药典委员会. 中国药典（二部）[M]. 北京：化学工业出版社， 2010：10，110.
[7] 刘文英. 药物分析[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2006：50，100.
（收稿日期：2012-02-17）
[关键词] 盐酸吉西他滨；气相色谱；残留溶剂
[中图分类号] R927.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2012）05-95-02
Determination of residual solvents in gemcitabine hydrochloride
LI Xiaobi1 WANG Chunling2
Jiangsu Hansoh Medicine Research Institute Co., Ltd., Lianyungang 222000, China
[Abstract] Objective To establish a method for detection of residual solvents in gemcitabine hydrochloride. Methods The residual solvents in gemcitabine hydrochloride was determined by headspace GC with DB-WAX capillary column（30 mm×0.53 mm，1μm） with FID detector and nitrogen as the carries gas. The injector temperature was 150℃， the detector temperature was 240℃， the column temperature rosed by program， the initial temperature was 40℃ and maintained for 7 min，rosed to 120℃ with a rate of 10℃/min. Results The solvents could be completely separated， and the calibration curves of each solvent had good linear relationship within a certain range. Conclusion The method is proved accurate and reliable， it can be used for the determination of residual solvents in gemcitabine hydrochloride.
[Key words] Gemcitabine; Hydrochloride; GC; Residual solvents
盐酸吉西他滨（gemcitabine hydrochloride）化学名2-脱氧-2，2-盐酸二氟脱氧胞苷（β-异构体），是一种阿糖胞苷类似物，属于新型抗嘧啶核苷酸代谢化疗药物，属细胞周期特异性抗代谢类药物，主要作用于DNA合成期的肿瘤细胞，即S期细胞。在过去的临床工作中，笔者观察到盐酸吉西他滨是疗效较好而毒副反应较少的化疗药物之一[1-2]。残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂[3]，根据ICH原则和中国药典二部附录相关指导原则[4-5]要求，现将本品的合成工艺中存在的甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇的残留量进行测定。由于本品溶于水而不溶于二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺，因此本分析方法将以水为溶剂，采用顶空气相色谱法[6-7]进行测定。
1 仪器与试剂
仪器：电子分析天平，梅特勒XS105，Agilent 7890 GC气相色谱仪，顶空进样器 G1888，安捷伦色谱工作站；色谱柱：DB-WAX（30 mm×0.53 mm×1.0μm）。试剂：甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇均为分析纯，来自国药集团化学试剂股份有限公司。
2 试验过程与结果
2.1 色谱条件
照残留溶剂测定法（中国药典2010年版二部附录Ⅷ P第二法），以DB-WAX毛细管色谱柱，氢火焰离子化（FID）检测器，检测器温度240℃；进样口温度150℃；柱初温40℃维持7 min，以10℃/min升温速率升至120℃；顶空瓶平衡温度95℃，平衡时间30 min；进样体积1 mL，分流比1∶10；取样针温度为100℃；传输线温度为110℃。
2.2 试验溶液配制
取本品约100 mg精密称定，置顶空瓶中，精密加入水5 mL、无水硫酸钠2 g，密封，作为供试品溶液；另取丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯适量，精密称定，用水制成每毫升中含丙酮100μg、乙酸乙酯100μg、甲醇60μg、异丙醇100μg、甲苯17.8μg的溶液，作为系统适用性溶液。
2.3 系统专属性试验
量取系统适用性溶液5 mL置顶空瓶中，注入气相色谱仪，记录图谱，有实验看出，各峰最小分离度为2.5，表明本分析方法专属性强。见图1。
图1 系统适用性
2.4 定量限与检测限
精密称取甲醇、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、甲苯适量，置量瓶中，用水溶解制成储备液。逐步稀释储备液，精密移取上述溶液各5 mL分别置入顶空瓶中，并分别加入2 g无水硫酸钠，扎盖密闭，置入顶空进样器中。进样至信噪比（峰高/基线噪声）（3±1）为检测限、信噪比（10±2）为定量限。见表1。
2.5 线性关系试验
按照标准限度浓度配制线性关系试验溶液，丙酮在0.057 8～124μg/mL、乙酸乙酯在0.048 0～121μg/mL、甲醇在0.564～72.2μg/mL、异丙醇在0.138～124μg/mL、甲苯在0.021 8～21.4μg/mL，测定结果线性相关系数皆＞0.999，说明线性良好，线性方程及相关系数见表2。
2.6 系统精密度
精密称取丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯适量，用水稀释定容，配成浓度分别为101.0、103.0、60.8、103.0、17.8μg/mL的溶液，作为对照品溶液。精密移取对照品5 mL置顶空瓶中，加入2 g无水硫酸钠，扎盖密闭，制取6份备用。将上述溶液置入顶空进样器中，连续6次进样对照品溶液。实验结果见表3。
由表3可见，上述6份溶液中5个溶剂的峰面积的最大RSD为5.62%，小于10.0%的要求，说明系统的精密度符合要求。
2.7 回收率
精密称取丙酮100.2 mg、乙酸乙酯104.0 mg、甲醇62.7 mg、异丙醇101.5 mg、甲苯17.4 mg置100 mL量瓶中，用水稀释定容，作为储备液。取供试品约100 mg，置顶空瓶中精密称定，共称9份，用储备液进行配置成限量10%、100%、120%的测试液，置入顶空进样器中，定量测定的5个溶剂的平均回收率介于95％～110％之间，各溶剂回收率的最大相对标准偏差RSD为9.57%，表明本方法的准确性较好。
3 讨论
采用顶空气相色谱法测定盐酸吉西他滨中残留的丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、甲苯，专属性好。对检测限、定量限的测定，说明该方法具有较高的灵敏度，能保证对低限度的溶剂的准确测定，另外对线性关系、系统精密度、回收率的测定，充分说明该方法测定样品中残留的几种溶剂的线性与范围良好、准确度好，能对样品中的残留溶剂进行很好的控制。
[参考文献]
[1] 李留树， 王如良. 非小细胞肺癌的治疗进展[J]. 解放军保健医学杂志， 2011， 13（3）：199-200.
[2] 陈新谦， 金有豫， 汤光，等. 新编药物学[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2004：675.
[3] 国家食品药品监督管理局. 化学药物残留溶剂的研究技术指导原则//药品研究技术指导原则[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2010：10，50.
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[5] 张数秀， 曹志胜， 惠秋莎，等. 最新药品注册工作指南[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2007：18，100.
[6] 国家药典委员会. 中国药典（二部）[M]. 北京：化学工业出版社， 2010：10，110.
[7] 刘文英. 药物分析[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2006：50，100.
（收稿日期：2012-02-17）