【摘 要】
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β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶.该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法.β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009;南通秋之友生物科技有限公司,江苏南通226236
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β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶.该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法.β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生成胸腺嘧啶,由于β-胸苷与胸腺嘧啶在300 nm处均有吸光度,反应后通过测量反应液300 nm处的吸光度,可测定反应中生成的胸腺嘧啶的量,从胸腺嘧啶的生成量的多少来判断胸苷磷酸化酶的活性.研究结果表明,在5％菌体浓度、10 mmol/L β-胸苷、0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH 6.9)中,37℃反应20 min,即可准确测定胸苷磷酸化酶的活性.利用上述方法测定胸苷磷酸化酶活性,活性能达80％,高于前人报道的方法所测得的酶活性.其中,乙酰短杆菌来源的胸苷磷酸化酶的表观米氏常数Km为11.9 mmol/L.
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