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【摘 要】 目的：用高效液相色谱法测定吉如很-10（宁心丸）中胆红素的含量。方法：采用Shim-pack VP-ODS C18色谱柱（150×4.6mm，5μm），以甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）为流动相，流速1.0ml/min;柱温25℃;检测波长为450nm;进样量：10μl。结果：胆红素在0.01524～0.2313 μg范围内呈良好的线性关系，r= 0.9996。精密度试验RSD=0.81%，重复性试验RSD=0.21%，平均回收率为99.1%，RSD=1.2%（n=6）。结论：方法简便、准确、稳定性、重现性较好，可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 吉如很-10（宁心丸）;胆红素;高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）13-0006-02
吉如很-10（宁心丸）由肉豆蔻、石膏、兔心、冰片、麦冬、阿魏、人工牛黄、檀香、苦参、朱砂等十味药材组成[1]。具有调节气血不和，改善心脑供血，加强心肌心缩。用于心肌病，高心病，心脑供血不足，植物神经紊乱，尤其是冠心病及各种心律失常有良好的疗效。本试验对吉如很-10（宁心丸）中人工牛黄所含的有效成分胆红素进行含量测定方法学考察[2]，得到较满意的准确度和精密度试验结果，说明本试验方法是可行的，可作为吉如很-10（宁心丸）的质量控制方法。
1 仪器和试药
1.1 仪器 岛津LC-10A型高效液相色谱仪（日本），SPD-VP紫外检测器，CLASS-VP色谱工作站，TP-300超声波清洗机。
1.2 试药 胆红素（批号：100077-200805，中国药品生物制品检定所）; 样品：吉如很-10（批号： 20081003、20090217、20090509，内蒙古通辽市科左中旗蒙医院提）。甲醇（色谱纯，天津天大化学试剂厂）;水为重蒸馏水;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 采用Shim-pack VP-ODS C18色谱柱（150×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）;以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流速1.0ml/min;柱温25℃;检测波长为450nm;进样量：10μl。理论塔板数：N≥2000;拖尾因子：1.10。检测过程中系统稳定。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取胆红素对照品15.42mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得（每1ml含胆红素15.42μg）。
2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1.0g，精密称定，置25ml容量瓶中，加三氯甲烷15 ml，进行超声提取（功率120W，频率40kHz）10min，取出，放冷，加甲醇5ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 阴性对照试验 取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照品（缺人工牛黄），操作同样品分析项下方法，测得结果为：阴性对照品色谱图中在与胆红素对照品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对吉如很-10中胆红素的测定无干扰。
2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9、10、15μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对浓度进行回归分析，结果胆红素在0.01524～0.2313 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：y=2.3E-07x + 0.002061，r=0.9996。
2.6 精密度试验 精密量取胆红素对照品溶液（0.01542mg /ml）10μl，连续进样5次，测定胆红素峰面积值，结果峰面积平均值639133，RSD为0.81%。
2.7 稳定性试验 取同一份供试品（批号20081003）溶液，间隔0、3、6、12、15、19小时、精密量取10μl注入色谱仪，测定，记录峰面积值，结果平均峰面积842207.7，RSD为0.1%，表明供试品溶液在19小时内稳定性良好。
2.8 重复性试验 取同一批号样品（批号：20090217）6份，研细，精密称取约1g，按上述色谱条件测定，测定每份样品含量。按外标法计算含量。平均含量为0.451 RSD为0.21%，表明本试验重现性良好，结果见表1。
2.9 加样回收试验 取供试品（含量0.452mg/g）6份，各约0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，各精密加入用三氯甲烷配制的胆红素对照品溶液（浓度为0.01542mg/ml）1ml，再各精密加入三氯甲烷20ml，分别按含量测定项下的方法操作，测定每份供试品含量，计算回收率，结果平均回收率为99.1%，RSD为1.2%，结果见表2。
2.10 样品分析 按上述色谱条件，取三批样品（批号分别为20081003、20090217、20090509），照供试品溶液的制备方法，各进样各10μl，每批试样平行检测三次，以外标法计算含量。该条件下胆红素的保留时间为16.04min。供试品含量测定结果见表3。
3 讨论
3.1 提取条件的选择 分别考察了不同溶剂加入量和不同超声时间的提取方法，并考察了提取溶剂加入量（25、50、100ml），提取时间（5、10、15min）。结果得到最有化的提取方法为加三氯甲烷25ml，超声处理10min。超声时间过长或溶剂过热使胆红素不稳定，影响测定结果。
3.2 本法简便、灵敏、准确、专属性强，故认为可作控制吉如很-10（宁心丸）的检测方法。
参考文献
[1]内蒙古食品药品监督管理局.内蒙古蒙药制剂规范（第一册）[S].内蒙古：内蒙古人民出版社，2007：168.
[2]国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
（收稿日期：2014.04.27）
【关键词】 吉如很-10（宁心丸）;胆红素;高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）13-0006-02
吉如很-10（宁心丸）由肉豆蔻、石膏、兔心、冰片、麦冬、阿魏、人工牛黄、檀香、苦参、朱砂等十味药材组成[1]。具有调节气血不和，改善心脑供血，加强心肌心缩。用于心肌病，高心病，心脑供血不足，植物神经紊乱，尤其是冠心病及各种心律失常有良好的疗效。本试验对吉如很-10（宁心丸）中人工牛黄所含的有效成分胆红素进行含量测定方法学考察[2]，得到较满意的准确度和精密度试验结果，说明本试验方法是可行的，可作为吉如很-10（宁心丸）的质量控制方法。
1 仪器和试药
1.1 仪器 岛津LC-10A型高效液相色谱仪（日本），SPD-VP紫外检测器，CLASS-VP色谱工作站，TP-300超声波清洗机。
1.2 试药 胆红素（批号：100077-200805，中国药品生物制品检定所）; 样品：吉如很-10（批号： 20081003、20090217、20090509，内蒙古通辽市科左中旗蒙医院提）。甲醇（色谱纯，天津天大化学试剂厂）;水为重蒸馏水;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 采用Shim-pack VP-ODS C18色谱柱（150×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）;以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流速1.0ml/min;柱温25℃;检测波长为450nm;进样量：10μl。理论塔板数：N≥2000;拖尾因子：1.10。检测过程中系统稳定。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取胆红素对照品15.42mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得（每1ml含胆红素15.42μg）。
2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1.0g，精密称定，置25ml容量瓶中，加三氯甲烷15 ml，进行超声提取（功率120W，频率40kHz）10min，取出，放冷，加甲醇5ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 阴性对照试验 取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照品（缺人工牛黄），操作同样品分析项下方法，测得结果为：阴性对照品色谱图中在与胆红素对照品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对吉如很-10中胆红素的测定无干扰。
2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9、10、15μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对浓度进行回归分析，结果胆红素在0.01524～0.2313 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：y=2.3E-07x + 0.002061，r=0.9996。
2.6 精密度试验 精密量取胆红素对照品溶液（0.01542mg /ml）10μl，连续进样5次，测定胆红素峰面积值，结果峰面积平均值639133，RSD为0.81%。
2.7 稳定性试验 取同一份供试品（批号20081003）溶液，间隔0、3、6、12、15、19小时、精密量取10μl注入色谱仪，测定，记录峰面积值，结果平均峰面积842207.7，RSD为0.1%，表明供试品溶液在19小时内稳定性良好。
2.8 重复性试验 取同一批号样品（批号：20090217）6份，研细，精密称取约1g，按上述色谱条件测定，测定每份样品含量。按外标法计算含量。平均含量为0.451 RSD为0.21%，表明本试验重现性良好，结果见表1。
2.9 加样回收试验 取供试品（含量0.452mg/g）6份，各约0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，各精密加入用三氯甲烷配制的胆红素对照品溶液（浓度为0.01542mg/ml）1ml，再各精密加入三氯甲烷20ml，分别按含量测定项下的方法操作，测定每份供试品含量，计算回收率，结果平均回收率为99.1%，RSD为1.2%，结果见表2。
2.10 样品分析 按上述色谱条件，取三批样品（批号分别为20081003、20090217、20090509），照供试品溶液的制备方法，各进样各10μl，每批试样平行检测三次，以外标法计算含量。该条件下胆红素的保留时间为16.04min。供试品含量测定结果见表3。
3 讨论
3.1 提取条件的选择 分别考察了不同溶剂加入量和不同超声时间的提取方法，并考察了提取溶剂加入量（25、50、100ml），提取时间（5、10、15min）。结果得到最有化的提取方法为加三氯甲烷25ml，超声处理10min。超声时间过长或溶剂过热使胆红素不稳定，影响测定结果。
3.2 本法简便、灵敏、准确、专属性强，故认为可作控制吉如很-10（宁心丸）的检测方法。
参考文献
[1]内蒙古食品药品监督管理局.内蒙古蒙药制剂规范（第一册）[S].内蒙古：内蒙古人民出版社，2007：168.
[2]国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
（收稿日期：2014.04.27）