【摘 要】
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目的 应用C6/36细胞系3种细胞分离方法分离血清中登革1型病毒并探讨其分离效率. 方法 采用血清预稀释法,将已鉴定为登革Ⅰ型病毒的阳性血清作10-1～10-10等10个10倍梯度稀释并
【机 构】
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中山市疾病预防控制中心,广东中山,528400
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目的 应用C6/36细胞系3种细胞分离方法分离血清中登革1型病毒并探讨其分离效率. 方法 采用血清预稀释法,将已鉴定为登革Ⅰ型病毒的阳性血清作10-1～10-10等10个10倍梯度稀释并接种于长满单层C6/36细胞的培养管；采用共培养法,将血清作50至6400等8个梯度倍比稀释,再加等体积C6/36细胞悬液作共培养；采用直接接种法,将25μ1、50u1、100μ1、150μ1、200μ1血清接种于长满单层C6/36细胞的培养管.连续7d,每天观察细胞生长情况,收获细胞分离液并提取核酸,然后采用Real-time PCR检测其CT值. 结果 血清标本呈登革Ⅰ型病毒阳性,CT值为26.3;血清预稀释法与共培养法均未发现由血清毒性引发的非特异性细胞病变,除了10-10稀释度呈弱阳性外,其余稀释度的CT值均在11-15之间.直接接种法中25μ1、50μ1接种量培养管未发现由血清毒性引起明显的非特异性细胞病变,检测其CT值约为19,100μ1、150μ1、200μ1接种量的细胞第2d就因血清毒性完全被破坏. 结论 3种方法都能成功分离登革1型病毒,降低血清对细胞的干扰作用能提高分离效率.
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