【摘 要】
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旨在验证猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株在非洲绿猴胚胎肾细胞（MARC-145）上是否具有抑制宿主Ⅲ型干扰素λ（IFN-λ）的能力，筛选并鉴定介导抑制宿主IFN-λ的病毒蛋白。通过预测猪IFN-λ1和IFN-λ3启动子序列，以提取的猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）基因组DNA为模板，扩增启动子序列，构建启动子荧光素酶报告基因质粒pIFN-λ1-Luc和pIFN-λ3-Luc,使用双荧光素酶报告基
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2021YFD1801104）； 国家自然科学基金项目（32272996）；
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旨在验证猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株在非洲绿猴胚胎肾细胞（MARC-145）上是否具有抑制宿主Ⅲ型干扰素λ（IFN-λ）的能力，筛选并鉴定介导抑制宿主IFN-λ的病毒蛋白。通过预测猪IFN-λ1和IFN-λ3启动子序列，以提取的猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）基因组DNA为模板，扩增启动子序列，构建启动子荧光素酶报告基因质粒pIFN-λ1-Luc和pIFN-λ3-Luc,使用双荧光素酶报告基因、实时荧光定量PCR两种方法分别检测病毒感染、病毒蛋白表达对IFN-λ1和IFN-λ3启动子活性和转录本水平的调控。结果显示：成功构建了启动子荧光素酶报告质粒pIFN-λ1-Luc和pIFN-λ3-Luc,证实了PEDV AH2012/12变异株在MARC-145上能够抑制宿主IFN-λ产生，且非结构蛋白（NSP）1、5、9和开放阅读框（ORF）3下调IFN-λ1,NSP1、NSP5、NSP8和ORF3下调IFN-λ3,其中NSP5的下调作用最为明显。研究结果为PEDV逃逸IFN-λ提供了理论依据，丰富了PEDV调控先天性免疫的分子机制。
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