【摘 要】
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很多国内的细胞培养实验室受到"黑胶虫"（或称为"胶虫"、"焦虫"）污染的困扰,类似的污染在国外通常称为"纳米细菌"（nanobacteria）污染,但"黑胶虫"/纳米细菌究竟是何物种抑或是一种非生命颗粒,至今还没有定论.我们将细胞培养中的污染物从培养基中分离出来,进行培养和形态学观察,并利用16S r DNA鉴定技术及VITEK-2微生物鉴定系统对"黑胶虫"进行鉴定,最后通过抗生素敏感试验及细胞结
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81872295）； 广东省自然科学基金（2018A030313819）； 广东省恶性肿瘤表观遗传与基因调控重点实验室开放基金（2017B030314026）～～；
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很多国内的细胞培养实验室受到"黑胶虫"（或称为"胶虫"、"焦虫"）污染的困扰,类似的污染在国外通常称为"纳米细菌"（nanobacteria）污染,但"黑胶虫"/纳米细菌究竟是何物种抑或是一种非生命颗粒,至今还没有定论.我们将细胞培养中的污染物从培养基中分离出来,进行培养和形态学观察,并利用16S r DNA鉴定技术及VITEK-2微生物鉴定系统对"黑胶虫"进行鉴定,最后通过抗生素敏感试验及细胞结晶紫染色技术筛选出抑制"黑胶虫"增殖的抗生素及可用于细胞培养的工作浓度.形态学观察结果显示:"黑胶虫"在普通倒置显微镜下呈点状或片状;电镜下展示为杆状,长1 300～1 600 nm,宽400～500 nm;在激光共聚焦扫描显微镜400倍镜下进行原地"布朗运动". 16 S rDNA鉴定及VITEK-2微生物鉴定系统结果显示:本实验室分离的"黑胶虫"为一株短波单胞菌属（Brevundimonas）的新菌株,该菌株与Brevundimonas diminuta的相似性为97.8%,与Brevundimonas faecalis的相似性为98.1%.抗生素敏感试验结果显示:"黑胶虫"对氯霉素（25 mg/L）、红霉素（200 mg/L）和四环素（2.5 mg/L）敏感,对氨苄青霉素（50 mg/L）、嘌呤霉素（2 mg/L）、青霉素-链霉素双抗（100×）和庆大霉素-两性霉素B双抗（100×）均不敏感.细胞结晶紫染色结果显示:细胞培养基中添加一定浓度的氯霉素（25 mg/L）、红霉素（200 mg/L）或四环素（2.5 mg/L）均可抑制细胞培养中"黑胶虫"的增殖,降低其对细胞增殖的抑制作用.综上所述,本研究分离鉴定的"黑胶虫"为一种短波单胞菌,低浓度的氯霉素、红霉素或四环素均可降低该菌对细胞增殖的抑制作用.鉴于研究的局限性,我们不排除"黑胶虫"是其他物种的可能性,但是本研究为"黑胶虫"的种属鉴定及细胞无菌化培养提供了新的研究思路及方法,并有望帮助一些实验室解决"黑胶虫"污染的困扰.
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