【摘 要】
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目的 探讨活血定眩胶囊含药血清对乏氧培养bEnd.3细胞自噬的干预情况.方法 除正常组外,将细胞乏氧培养建立氧糖剥夺(OGD)模型,设置0,3,6和9h不同时间段模型.用CCK8检测不同时
【机 构】
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甘肃中医药大学中医临床学院,甘肃兰州 730000;内蒙古医科大学中医学院,内蒙古呼和浩特010110;甘肃中医药大学中医临床学院,甘肃兰州,730000;甘肃中医药大学附属医院骨科,甘肃兰州,730
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目的 探讨活血定眩胶囊含药血清对乏氧培养bEnd.3细胞自噬的干预情况.方法 除正常组外,将细胞乏氧培养建立氧糖剥夺(OGD)模型,设置0,3,6和9h不同时间段模型.用CCK8检测不同时间段细胞活性,用GFP-LC3转染,细胞免疫荧光检测4个时间段bEnd.3细胞微管相关蛋白1轻链3B(LC3 Ⅱ)表达情况,以明确细胞自噬最佳时间段;然后将bEnd.3细胞分为6组:正常组、模型组、对照组和高、中、低3个浓度实验组,在6h后,高、中、低3个浓度实验组分别加入3个百分含量(15%,10%,5%)的活血定眩胶囊含药血清,对照组加入氟桂利嗪32μmol·L-1.用免疫印迹法检测各组bEnd.3细胞的LC3 Ⅱ、自噬重要调控因子Beclin-1和泛素结合蛋白P62(P62)蛋白的表达水平.结果 在上述4个时间点的细胞存活率分别为(100.00±0.00)%,(86.00+2.41)%,(60.00±2.31)%和(35.00±3.35)%;bEnd.3细胞在乏氧培养6h后LCⅡ含量较高,空白组、模型组和中剂量实验组的LC3B-Ⅱ相对表达量分别为1.01 +0.03,1.84±0.02和2.00±0.01;这3组的Bcline-1相对表达量为0.27±0.01,0.39 ±0.01和0.43±0.01;这3组的P62相对表达量分别为0.47±0.01,0.38±0.01和0.35±0.01.上述指标:模型组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);中剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P <0.05).结论 活血定眩胶囊含药血清通过调控多个蛋白表达水平来促进适度自噬,调节血管内皮功能.
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