【摘 要】
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目的:探讨杜仲皮水提取物(water extract of Eucommia cortex,WEEC)对类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)生长与凋亡的影响及分子机制.方法:采用不同浓度WEEC(0.1、0.3、0.9和2.7 g/L)处理RA-FLS,CCK-8法检测细胞活力,选取最适WEEC浓度进行后续实验.细胞分别转染pcDNA-circFADS2和/或anti-miR-491-5p,探讨W
【机 构】
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浙江省舟山市中医院急诊骨伤科,浙江舟山316000;浙江省舟山市中医院骨关节科,浙江舟山316000;宁波龙赛医院骨伤科,浙江宁波315299;浙江大学医学院附属第二医院骨科,浙江杭州310009
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目的:探讨杜仲皮水提取物(water extract of Eucommia cortex,WEEC)对类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)生长与凋亡的影响及分子机制.方法:采用不同浓度WEEC(0.1、0.3、0.9和2.7 g/L)处理RA-FLS,CCK-8法检测细胞活力,选取最适WEEC浓度进行后续实验.细胞分别转染pcDNA-circFADS2和/或anti-miR-491-5p,探讨WEEC对RA-FLS生长与凋亡的影响及分子机制:用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测cleaved caspase-3的蛋白水平;RT-qPCR检测环状RNA-FADS2(circular RNA-FADS2,circFADS2)和miR-491-5p的表达水平;双萤光素酶基因报告实验检测circ?FADS2和miR-491-5p的靶向关系.结果:不同浓度WEEC处理后,RA-FLS的活力降低,凋亡率升高,cleaved cas?pase-3蛋白水平升高,circFADS2表达水平降低,miR-491-5p表达水平升高(P<0.05).过表达circFADS2或抑制miR-491-5p表达后,WEEC处理的细胞活力升高,凋亡率及cleaved caspase-3蛋白水平降低(P<0.05).circFADS2靶向调控miR-491-5p,过表达miR-491-5p逆转了circFADS2质粒对WEEC处理的RA-FLS活力与凋亡的影响.结论:杜仲皮水提取物通过调节circFADS2/miR-491-5p抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞生长并促进其凋亡.
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在不同环境下,细胞需要协调多种信号通路而有组织地适应不断变化的内外环境,以维持细胞稳态.鉴于疾病的复杂性,需要我们向整体研究的思路转变,以重要信号通路为立足点,深入了解疾病背景下信号通路在维系细胞稳态中的调控机制,为药物靶向治疗提供更多的理论基础.
目的:探究长期高葡糖糖水平对胰腺β细胞囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)表达水平的影响,及其是否介导2型糖尿病发病初期胰岛素水平异常.方法:(1)体外实验分别将大鼠胰腺β细胞系RINm5F和原代分离的C57BL/6小鼠胰岛暴露于含有0、10、20和30 mmol/L葡萄糖的RPMI-1640培养液中处理24 h或48 h,通过RT-qPCR和Western blot技术检测不同浓度的葡萄糖对CFTR mRNA和蛋白表达水平的影响,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同浓度的葡萄糖处理24 h后胰岛
1 骨细胞概述rn骨细胞是骨骼系统中含量最丰富、分布最广泛的细胞,由成骨细胞分化而来,包埋于矿化的骨基质中,占成年人骨骼细胞的90％～95％,寿命可长达25年[1].多年来研究者对骨细胞的生物学性质与功能知之甚少.随着骨细胞分离和体外培养技术的开发,人们对骨细胞的认知有了极大的拓展.从最早认为骨细胞是埋藏在矿化骨基质中静止的、不活跃的细胞[2],到发现其机械应力转导和矿物质稳态维持功能[3],再到近几年研究发现骨细胞的骨代谢调控作用[4],骨细胞目前已成为骨生理和骨病理研究的热点.
纤维化通常被认为是组织损伤修复过程中促进伤口愈合的产物.机体受到病理刺激损伤后,组织将开始自我修复,及时高效地替换死亡或受损的细胞,这一修复机制是机体最基本、最重要的生物学过程之一.修复过程通常分为再生阶段和纤维增生阶段.首先当细胞受损后,同类型的细胞进行替换,防止损伤持续;其次正常的实质组织可被结缔组织所取代.
目的:筛选前期研究中EB病毒(EBV)阳性的15例不同类型淋巴瘤病例,对这15例EBV阳性病例进行PCR扩增及EBV核抗原1(EBNA1)羧基端测序分析,观察是否存在突变热点AA487及AA466-527之间的变异.方法:采用PCR方法对EBV阳性病例进行EBNA1基因羧基端的扩增,并将扩增产物送公司进行测序分析.同时分析淋巴瘤患者EBV表达与预后的相关性.结果:本次实验成功扩增15例病例,进行EBNA1基因羧基端测序分析发现,15例标本中EBNA1羧基端均出现序列变异,其中以往报道过的突变有:错义突变A
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)常表现为进行性认知功能障碍与行为损害,也是痴呆最常见的病因,目前全世界约有5000万患者.AD的病理特征是β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)沉积形成细胞外老年斑(senile plaques,SPs)和高磷酸化tau蛋白形成细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillarytangles,NFTs).此外,AD患者神经元进行性死亡,伴有氧化应激和铁超载.
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