【摘 要】
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目的 构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表迭.方法 从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限
【机 构】
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南京大学医学院附属南京市鼓楼医院,南京大学模式动物研究所
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目的 构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表迭.方法 从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoR Ⅰ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065 bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序.再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM 2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况.结果 成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达.结论 pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础.
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