探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在胞内高表达及胞外刺激促进胶质母细胞瘤U87MG增殖的机制。
方法培养胶质母细胞瘤U87MG细胞株，构建的pCMV/IGFBP-3质粒转染U87MG细胞，分为未处理组(Control)、转染pcDNA3.1(＋)、空载体组(NC1)、转染pCMV-Myc空载体组(NC2)、转染pCMV-IGFBP-3组(Ⅰ)、转染pcDNA3.1(＋)/ pCMV-Myc组(NC1＋NC2)，采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot检测IGFBP-3、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、B细胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表达；采用噻唑蓝(MTT)比色法分析IGFBP-3细胞因子对U87MG细胞的增殖作用，U87MG细胞经IGFBP-3于0、5、10、30 min时间段刺激后，提取的各时间段细胞总蛋白，定量后进行蛋白印迹分析，观察ERK1/2、bcl-XL蛋白的表达及ERK1/2磷酸化的变化。
结果Real-time PCR显示ERK1、ERK2、bcl-XL的mRNA相对表达量为(1.32±0.45)、(1.19±0.14)、(2.83±0.56)，ERK1的mRNA表达有升高趋势(P<0.01)，ERK2的mRNA表达无明显变化(P>0.05)，bcl-XL的mRNA明显升高(P<0.01)；Western blot发现ERK1/2的灰度值(178.86±4.89，188.19±5.07)蛋白表达量无变化，但其磷酸化水平明显增强，bcl-XL的灰度值(151.85±5.71，214.37±4.71)蛋白表达量明显升高。MTT比色法检测结果表明IGFBP-3浓度的增加，细胞株呈明显增殖效应，其中500 ng/ml的IGFBP-3细胞因子刺激作用较大(P<0.01)；刺激U87MG细胞株培养，蛋白印迹实验显示0、5、10、30 min、1、2 h时间段表达量，ERK1/2为163.18±4.45、159.36±5.67、161.27±3.23、172.41±4.01、177.41±2.42、169.11±1.45没有变化；pERK1/2(27.51±2.34、52.25±3.56、51.75±3.67、57.55±5.01、66.75±3.67、47.49±2.76)随时间延长而逐渐增加，2 h后出现减弱；bcl-XL(18.77±2.78、46.14±3.29、52.43±3.62、82.87±2.71、60.02±0.18、56.94±2.16)随时间延长而先增加后降低，在1 h出现下降。
结论IGFBP-3胞内高表达和从胞外刺激U87MG细胞后均能增加ERK1/2下游调控基因bcl-XL的表达，进一步促进胶质母细胞瘤瘤细胞的增殖。