【摘 要】
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目的 探讨Keap1沉默及染砷对Nrf2通路相关基因表达的影响及砷致皮肤早期氧化损伤的机制.方法 培养人源性正常HaCaT细胞(正常细胞)和Keap1沉默HaCaT细胞,将无机砷混合受试物按
【机 构】
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新疆医科大学公共卫生学院,乌鲁木齐,830011College of Public Health,Xinjiang Medical University,Urumqi 830011,China;
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目的 探讨Keap1沉默及染砷对Nrf2通路相关基因表达的影响及砷致皮肤早期氧化损伤的机制.方法 培养人源性正常HaCaT细胞(正常细胞)和Keap1沉默HaCaT细胞,将无机砷混合受试物按照LC50的1/100、1/50、1/10分为低(2.90 μmol/L)、中(5.80 μmol/L)、高(29.00 μmol/L)3个不同浓度组,以0 μmol/L无机砷混合受试物染毒Keap1沉默HaCaT细胞组为阴性对照组,正常细胞组为空白对照组,于3个时间点(24、48、72 h)采用实时荧光定量PCR检测Nrf2通路相关基因(Nrf2和Bach1)mRNA表达,使用ELISA试剂盒检测GSH、HO-1蛋白表达.结果 以阴性对照组作参照,Nrf2基因24 h 2.90、29.00 μmol/L染砷组表达上调,48 h和72 h 时2.90 μmol/L染砷组表达上调,而5.80 μmol/L及29.00 μmol/L染砷组表达均下调,差异有统计学意义 (P <0.012 5);Bach1基因24 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组表达上调,48 h 2.90、5.80 μmol/L染砷组表达上调,而72 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组表达均下调,差异有统计学意义 (P <0.012 5).随染毒浓度的增加,GSH蛋白和HO-1蛋白表达总体呈持续增长趋势.其中GSH蛋白24 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组,48 h 5.80 μmol/L和29.00 μmol/L染砷组以及72 h 29.00 μmol/L染砷组表达差异有统计学意义 (P <0.012 5);HO-1蛋白24、48、72 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组差异均有统计学意义 (P <0.012 5);空白对照组GSH蛋白和HO-1蛋白表达总体上低于阴性对照组,24 h差异均有统计学意义 (P <0.012 5).结论 Keap1基因沉默会引起Nrf2持续激活.Keap1、Nrf2、Bach1、GSH和 HO-1均参与砷诱导的抗氧化反应,并在砷致皮肤氧化应激损伤中发挥作用.
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