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苏丹红是一种化学染料，具有致癌性，不允许在食品中添加。但有些不法商贩为了让食品颜色更鲜艳，仍会使用苏丹红，因此加强对食品中苏丹红的检测十分必要。本实验在参考国内外检测方案的基础上，对检测方案进行了改善，实现了简单、迅速、准确的目的。
一、材料及方案
1.仪器。高效液相色谱仪安捷伦1100（二极管阵列检测器）和一些常用仪器。
2.试剂和标准物。甲醇（色谱纯度）；乙腈（色谱纯度）；有机酸溶剂（CH3COOH∶HCL∶H2O=10∶2∶1）；20%NAOH溶液；乙醚+石油醚（1+1）（分析纯度）。量取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红G和苏丹红7B各10.0mg作为标准贮备液（100 μg/mL），用乙醚将其溶解后，用正己烷配制成100mL的贮备液，用于标准系列的制备。
3.方法。（1）样品处理。在50mL软木管中用20mL有机酸溶液提取約10g样品2-3次，收集并合并低酸溶液，在水浴中蒸发大约2/3的酸。接下来用20%氢氧化钠溶液调节到微碱性，放入10mL乙醚+石油醚（1+1）在分液漏斗中萃取2-3次，然后将上层醚层收齐，在水浴中蒸发浓缩，甲醇定容至2.0mL，过0.45微米的滤膜，上机。（2）色谱条件。色谱柱Phenomenex cl8，250x4.60mm，5μm，流动速度是1.0mL/min。色谱柱的温度是30℃，流动相内的溶剂是酸性的水溶液（165mL的CH3COOH溶于1000mL的水）和溶剂B（乙腈）。它的梯度洗脱见表1。
苏丹橙G是432纳米，苏丹红I是478纳米，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红7B是520纳米；进样量是20微升，标准溶液浓度是5.0μg/mL。峰值出现的时间分别是苏丹红G（5.704分钟）、苏丹红I（7.227分钟）、苏丹红Ⅲ（15.470分钟）、苏丹红7B（21.510分钟）、苏丹红IV（22.241分钟）。
4.标准曲线及计算。量取标准贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0μg/mL，根据检测的条件制作标准曲线，计算方法为∶C*V/M=R。
二、结果
1.精密度实验。把配制完的浓度分别是1.0、2.0、5.0μg/mL的标准溶液根据测定条件，每种浓度检测6次，计算出平均变异数据。
2.回收率试验。在没有苏丹红的食物内加入1.0、2.0、5.0μg/kg的三个不同浓度开展回收实验，计算平均的回收率。
3.最小检出限度。称取样品10g，提取后再定容到2mL。
4.样品的检测。根据该种方法，对抽检的30种食物样品开始测定。
三、讨论
1.前处理方式的对比。当前，样品内的苏丹红的样品前处理办法有氧化铝层析柱法以及甲醇直接浸提法，两者均有优劣。利用苏丹红不但易溶于有机溶剂，而且易溶于有机酸的特性，本实验使用有机酸萃取法对样品开展提取纯化，解决了上述两种方法的不妥之处，操作简便、迅速，回收率可到85%以上，重现性好。
2.色谱条件的改善。本方法采用二极管阵列检测器同时检测苏丹红I等6种，所选要求应同时满足良好的分离效率和实用性。它可以同时被多个波长测定，因为它的色谱图是三维图谱，可以用保留时间和光谱定性表征，相较过去的紫外-可见光检测器更准确。而且测定时间只有23分钟，不但可以保证物质的分离结果，还可以实现日常检测对于迅速的需求。
由此可见，该方法可用于苏丹红I等6种物质的同时检测，且灵活、迅速，适用于日常检测。
一、材料及方案
1.仪器。高效液相色谱仪安捷伦1100（二极管阵列检测器）和一些常用仪器。
2.试剂和标准物。甲醇（色谱纯度）；乙腈（色谱纯度）；有机酸溶剂（CH3COOH∶HCL∶H2O=10∶2∶1）；20%NAOH溶液；乙醚+石油醚（1+1）（分析纯度）。量取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红G和苏丹红7B各10.0mg作为标准贮备液（100 μg/mL），用乙醚将其溶解后，用正己烷配制成100mL的贮备液，用于标准系列的制备。
3.方法。（1）样品处理。在50mL软木管中用20mL有机酸溶液提取約10g样品2-3次，收集并合并低酸溶液，在水浴中蒸发大约2/3的酸。接下来用20%氢氧化钠溶液调节到微碱性，放入10mL乙醚+石油醚（1+1）在分液漏斗中萃取2-3次，然后将上层醚层收齐，在水浴中蒸发浓缩，甲醇定容至2.0mL，过0.45微米的滤膜，上机。（2）色谱条件。色谱柱Phenomenex cl8，250x4.60mm，5μm，流动速度是1.0mL/min。色谱柱的温度是30℃，流动相内的溶剂是酸性的水溶液（165mL的CH3COOH溶于1000mL的水）和溶剂B（乙腈）。它的梯度洗脱见表1。
苏丹橙G是432纳米，苏丹红I是478纳米，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红7B是520纳米；进样量是20微升，标准溶液浓度是5.0μg/mL。峰值出现的时间分别是苏丹红G（5.704分钟）、苏丹红I（7.227分钟）、苏丹红Ⅲ（15.470分钟）、苏丹红7B（21.510分钟）、苏丹红IV（22.241分钟）。
4.标准曲线及计算。量取标准贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0μg/mL，根据检测的条件制作标准曲线，计算方法为∶C*V/M=R。
二、结果
1.精密度实验。把配制完的浓度分别是1.0、2.0、5.0μg/mL的标准溶液根据测定条件，每种浓度检测6次，计算出平均变异数据。
2.回收率试验。在没有苏丹红的食物内加入1.0、2.0、5.0μg/kg的三个不同浓度开展回收实验，计算平均的回收率。
3.最小检出限度。称取样品10g，提取后再定容到2mL。
4.样品的检测。根据该种方法，对抽检的30种食物样品开始测定。
三、讨论
1.前处理方式的对比。当前，样品内的苏丹红的样品前处理办法有氧化铝层析柱法以及甲醇直接浸提法，两者均有优劣。利用苏丹红不但易溶于有机溶剂，而且易溶于有机酸的特性，本实验使用有机酸萃取法对样品开展提取纯化，解决了上述两种方法的不妥之处，操作简便、迅速，回收率可到85%以上，重现性好。
2.色谱条件的改善。本方法采用二极管阵列检测器同时检测苏丹红I等6种，所选要求应同时满足良好的分离效率和实用性。它可以同时被多个波长测定，因为它的色谱图是三维图谱，可以用保留时间和光谱定性表征，相较过去的紫外-可见光检测器更准确。而且测定时间只有23分钟，不但可以保证物质的分离结果，还可以实现日常检测对于迅速的需求。
由此可见，该方法可用于苏丹红I等6种物质的同时检测，且灵活、迅速，适用于日常检测。