【摘 要】
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目的 探讨屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性分析.方法 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增屋尘螨Der p7基因,经酶切、连接后转化大肠杆菌,挑取阳性单克隆菌落,扩增
【机 构】
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深圳大学 过敏反应与免疫学研究所,广东 深圳,518060;深圳大学 第三附属医院呼吸科和变态反应科,广东 深圳,518001;深圳大学 过敏反应与免疫学研究所,广东 深圳 518060;深圳大学 第
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目的 探讨屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性分析.方法 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增屋尘螨Der p7基因,经酶切、连接后转化大肠杆菌,挑取阳性单克隆菌落,扩增培养后测序鉴定正确后大量表达;采用亲和层析法纯化表达产物,免疫印迹(Western blot)法鉴定其过敏原性;生物信息学方法分析其基因的同源性.结果 RT-PCR显示Der p7基因片段大小约700 bp;大量表达后进行的SDS-PAGE电泳分析显示,Der p7蛋白表达于沉淀物中,以包涵体蛋白为主,分子质量约39 kDa.Western blot显示该重组基因所表达的蛋白可与尘螨过敏患者的血清起反应,表明该重组蛋白具有过敏原性.生物信息学分析显示克隆的Der p7基因与Der f7基因的同源性约79.14％.结论 本实验成功获得大量表达及纯化后具有过敏原性的Der p7蛋白,对临床上完善对过敏性疾病的检测与治疗具有积极的意义.
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