基于肝癌PNC比例分析的抗转移小分子化合物筛选体系

来源 :中华肝脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangyi202
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目的

拟建立基于PNC(perinucleolar compartment)的抗肝癌转移小分子化合物筛选模型并验证其有效性。

方法

采用多嘧啶序列结合蛋白(PTB)单克隆抗体检测肝癌细胞HepG2、HepG2M与Huh7中PNC比例,通过划痕实验和Transwell实验分析肝癌细胞的迁移和侵袭性。以HepG2M细胞作为抗转移小分子化合物筛选的细胞模型,化合物(A1、A4、E696)作用细胞后,qPCR检测转移相关miRNAs(miR-141和miR-200c)的表达水平。多组间数据比较采用单因素方差分析。

结果

PTB免疫荧光显示PNC比例HepG2M > Huh7 > HepG2,其PNC比例与细胞的迁移和侵袭能力呈正相关。A1、A4、E696三种化合物可使HepG2M细胞的PNC比例分别降至22.88%±4.61%、14.22%±3.05%、26.12%±4.94%;划痕实验显示48 h划痕比值由17.70%±3.34%分别增加至64.50%±2.65%、83.40%±5.10%、57.20%±3.06%(F = 171.1,P < 0.01);Transwell实验示侵袭细胞数由(264.33±30.50)个分别减少至(104.33±13.50)个、(58.00±11.00)个、(111.33±19.50)个,F = 59.87,P < 0.01。三者抗转移效果与其PNC瓦解效力呈正相关。且A4呈剂量依赖性地上调miR-141和miR-200c的表达水平,5、10、20 μmol/L作用HepG2M细胞后,miR-141和miR-200c的相对水平分别增加至3.61±0.78、8.12±1.15、18.24±2.44(F = 88.01,P < 0.01)和2.82±0.43、4.82±0.89、10.74±1.22(F = 87.94,P < 0.01)。

结论

基于PNC指标的抗转移小分子化合物筛选体系,可为肝癌抗转移新药的研发提供有效的技术平台。

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