【摘 要】
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目的 探索丁苯探索丁苯酞(3-n-butylphthalide,NBP)和骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)联合治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的疗效和机制.方法 用髓鞘少突胶质糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,将小鼠随机分为EAE组〔腹腔注射磷酸盐
【机 构】
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昆明医科大学第一附属医院 神经内科 昆明 650032;中国人民解放军联勤保障部队第920医院 神经内科 昆明 650118;昆明医科大学基础医学院 人体解剖学与组织胚胎学系 昆明 650500;四川
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目的 探索丁苯探索丁苯酞(3-n-butylphthalide,NBP)和骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)联合治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的疗效和机制.方法 用髓鞘少突胶质糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,将小鼠随机分为EAE组〔腹腔注射磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate-buffered saline,PBS)〕、NBP处理EAE组(NBP组,腹腔注射NBP)、BMSCs移植EAE组(BMSCs组,BMSCs注入侧脑室,腹腔注射PBS)、BMSCs和NBP联合处理EAE组(BMSCs+NBP组,BMSCs注入侧脑室,腹腔注射NBP),每组各10只.并设正常小鼠10只为空白对照组(腹腔注射PBS).每日记录小鼠神经功能评分.诱导EAE 22 d后处死小鼠,劳克坚劳蓝(Luxol fast blue,LFB)脊髓髓鞘染色观察脱髓鞘情况;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清白介素(interleukin,IL)-6、IL-10、IL-17、IL-22和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)水平;免疫荧光染色检测脑中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达;Western blot法检测脊髓核因子κB〔nuclear factor(NF)-κB〕通路、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,PKB or Akt)通路及IL-17、叉状头/翅膀状螺旋转录因子(forkhead box P3,Foxp3)的表达.结果 各治疗组神经功能评分及平均分均较EAE组降低(P<0.05);BMSCs+NBP组评分下降较单独治疗组(NBP组和BMSCs组)更为明显(P<0.05);LFB染色与神经功能评分及平均分一致.与EAE组相比,各治疗组EAE小鼠血清促炎因子IL-6、IL-17和IL-22降低(P<0.05),抑炎因子IL-10和TGF-β增加(P<0.05);BMSCs+NBP组细胞因子表达的变化较BMSCs组更为显著(P<0.05).BMSCs+NBP组的GFAP、MAP-2、MBP表达均较BMSCs组增加(P<0.05).与EAE组相比,各治疗组p-NF-κB/NF-κB比值下降,而p-IκBα/IκBα比值上升,p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt比值均上升,IL-17/Foxp3比值降低,以BMSCs+NBP组最为显著(P<0.05).结论 NBP和BMSCs联合治疗可缓解EAE模型小鼠的症状,且疗效优于单独治疗.其机制与抑制NF-κB通路以调节Th17/Foxp3比例及激活PI3K/Akt通路以促进BMSCs成神经分化有关.
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