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【摘 要】 目的：探讨青海楤木不同溶剂萃取物对2型糖尿病小鼠模型SOD及MDA及脾脏和胸腺指数的影响。方法：以小鼠作为研究对象，通过采用链脲佐菌素法来建造2型糖尿病模型。将50只造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性组（盐酸二甲双胍）、楤木正丁醇组、楤木乙酸乙酯组、楤木乙醚组，另设空白对照组。在给药第14天取小鼠血清用ELISA法测定其超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平，同时并取脾脏、胸腺来计算脏器指数。结果：青海楤木不同溶剂萃取物均可降低MDA水平，提高血清SOD活力，尤以正丁醇组效果较为显著（P<0.05）；楤木正丁醇提取物对小鼠的脾脏指数和胸腺指数的影响与模型组相比具有统计学差异（P<0.05）。结论：青海楤木可缓解氧自由基的损害、提高脂质过氧化的抑制作用，增加2型糖尿病小鼠的免疫力。
【关键词】 楤木；链脲佐霉素；丙二醛；超氧化物歧化酶
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0019-02
糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一种以血糖升高为临床表现的代谢性疾病，具有发病率高、病情复杂、病程较长、治愈困难等特点，为终身性疾病。其病理改变常常涉及到全身各个系统，且发病机制尚未完全阐明，缺乏根治性的药物[1]。从天然植物中优选降糖组分，对于防治糖尿病及其并发症有重要的理论指导意义和实际应用价值[2]。
糖尿病患者由于糖代谢紊乱，使得体内的活性氧活力增强，MDA水平升高，SOD活性降低，从而引起氧化应激水平升高。研究发现，氧化应激可造成胰岛细胞功能障碍、胰岛素抵抗，在糖尿病及其并发症的发生、发展过程中起着关键的作用[3-4]。
楤木（Aralia chinensis L）为五加科楤木属植物，在我国大部分地区均有分布[5]。在唐初时期我国就开始用楤木的叶、皮等入药，目前，楤木可用于治疗糖尿病、肾病、胃溃疡等[6]。研究发现，龙牙楤木可使由四氧嘧啶导致的高血糖家兔其血糖值明显降低，具有较好的降糖效果[7]；甘肃省榆中县所产楤木的根皮能明显降低由四氧嘧啶导致的糖尿病大鼠模型的血脂和血糖[8]。青海楤木属于特有种，仅在青海省的循化孟达林区有天然分布，而且是青海省唯一的一種木本蔬菜在西宁市进行人工栽培，有望做为青海省的大量引种对象。温度是影响楤木生长的主要因素，而青藏高原所特有的气候，如昼夜温差大、全年低温时间长、紫外线强等有可能对楤木药用成分、含量或者功效有着重要的影响[9]。因此，研究以青海楤木为研究对象，探讨其降糖作用的有效部位及主要降糖成分筛选，为楤木资源开发提供依据。
1 仪器与材料
1.1 动物 清洁级昆明种小鼠（18～22g）共60只，雄性，购自甘肃兰州大学医学院，合格证号；SCXK（甘）2009-0004。
1.2 药材 楤木采自青海省循化县孟达天然林区，由青海大学医学院中药学教研室鉴定为高原药食两用植物楤木；盐酸二甲双胍（批号：20130731，北京中惠药业有限公司）。
1.3 试剂 链脲佐菌素（批号：CAS#18883-66-4，Sigma公司），用前用0.1 mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.5）配成1%的链脲佐菌素（STZ）溶液；超氧化物歧化酶（批号：20131116，南京建成生物工程研究所）；丙二醛（批号：20131119，南京建成生物工程研究所）。其余试剂均为分析纯。
1.4 仪器 瑞特GM300血糖测定仪；ADVZA2400全自动生化分析仪（西门子）；高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）。
2 实验方法
2.1 青海楤木降血糖部位的提取 称取500g干燥的楤木根皮，经研末后，用6倍体积70%的乙醇进行回流提取，2h/次，共3次，浓缩干燥后得到乙醇粗提取物。然后用水将其溶解，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇来进行萃取，萃取后进行减压回收得不同溶剂提取物。再分别在乙醚和乙酸乙酯的萃取物里加入阿拉伯胶粉5g，研磨均匀。然后再按照植物油∶水∶胶（4∶2∶1）的比例，将其配制成浓度为1g/ml的O/W混悬液。正丁醇的萃取物配成水溶液浓度为1g/ml，将三种溶液全部低温避光保存备用。
2.2 建立糖尿病动物模型 将50只小鼠给予高糖高脂饲料喂养。高糖高脂组成：62.5%普通饲料；10.0%猪油；20.0%蔗糖；5%蛋黄粉；2%胆固醇；0.5%胆酸盐，喂养14d后，连续3d用链脲佐菌素溶液（80 mg·kg-1·d-1）进行腹腔内注射，来诱导小鼠的2型糖尿病模型[2-3]，在造模3d后禁食12h断尾采血检测，其空腹血糖值超过11.0 mmol/L[9]的小鼠认为造模成功。
2.3 分组与给药 将造模成功的50只小鼠随机分5组，每组10只。其中1组为模型组，另外4组分别为阳性组（盐酸二甲双胍0.2g/kg）、楤木正丁醇组、楤木乙酸乙酯组、楤木乙醚组，各组小鼠均每日灌胃1次，连续14d。空白对照组同模型组一样每天灌胃用等量生理盐水。
2.4 血糖指标的检测 给药第14天时将小鼠眼球摘出取血，放置凝后于低温下以3000r/min的转速进行全血离心15min，使血清分离，对MDA和SOD水平进行测定，测定方法完全按照试剂盒说明书进行。另外取小鼠的胸腺和脾脏，称重，并计算其脏器指数。脏器指数（%）=脏器质量（g）/动物质量（g）×100%。
2.5 数据处理 数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析，计量资料采用均数加减标准差（x±s）表示，采用方差分析对多个样本的均数进行比较，采用LSD-t检验进行组间比较，P<0.05表明差异有统计学意义。
3 结果与分析
3.1 青海楤木对小鼠血清SOD活性的影响 与模型组比，楤木不同溶剂萃取物均能使小鼠血清SOD活力有所提高，尤其以正丁醇组较好（P<0.05）。表明楤木不同溶剂萃取物可以增加2型糖尿病小鼠的活性氧清除机制。结果见表1。 3.2 青海楤木对小鼠血清MDA水平的影响 与空白组相比，模型組小鼠的血清中MDA浓度差异具有统计学意义（P<0.05），提示实验小鼠2型糖尿病氧化损伤严重。与模型组比，楤木不同溶剂萃取物均能够降低MDA水平（P<0.05），使其基本恢复至正常水平。表明楤木不同溶剂萃取物有一定缓解氧自由基的损害、抑制脂质过氧化的作用。见表2。
3.3 青海楤木不同溶剂萃取物对小鼠脏器功能的影响 与空白组相比，模型组的2型糖尿病小鼠其脾脏指数与胸腺指数明显降低，表明2型糖尿病可使脾脏与胸腺显著变小，导致免疫功能下降。楤木正丁醇组小鼠的脾脏指数与胸腺指数与模型组相比明显增大（P<0.01），但仍未到达正常水平，显示楤木的提取物能促进糖尿病小鼠胸腺的生长和发育，提高小鼠的免疫能力，从而使糖尿病小鼠的免疫器官和功能得以保护。见表3。
4 讨论
通过高脂高糖饲料喂养小鼠辅助链脲佐菌素（STZ）来建造糖尿病动物模型[6]，给药后各组小鼠的血清MDA水平均有一定程度的降低（P<0.05），血清SOD活力均有所升高 （P<0.05），表明青海楤木不同溶剂萃取物具有一定抗氧化、降血糖作用。
脾脏和胸腺是十分重要的淋巴器官，与免疫功能密切相关，高血糖对脾脏和胸腺生长发育有一定影响。用药后发现，糖尿病小鼠胸腺的生长发育有所促进，可增加其免疫能力，可用来保护糖尿病小鼠的免疫器官。表明青海楤木的正丁醇提取物对糖尿病模型小鼠的免疫器官具有一定的保护作用。
实验研究青海楤木不同溶剂萃取物对2型糖尿病小鼠的SOD和MDA的影响，为青海楤木资源进一步研究提供了基础，对开发青藏高原植物资源具有重大的意义，值得进一步的研究与开发。
参考文献
[1]张晟， 陈祥贵.降血糖植物皂苷研究进展[J].中药材，2007，30（5）：616-620.
[2]洪良健，窦芳，田向荣，等.楤木化学成分的研究[J].中南药学，2012，10（3）： 198-201.
[3]Piro S， Anello M， Di Pietro C， et al. Chronic exposure to free fatty acids or high glucose induces apoptosis in rat pancreatic islets：possible role of oxidative stress[J]. Metabolism， 2002，51（10）：1340-1347.
[4]Fariss MW，Chan CB，Patel M，et al.Role of mitochondria in toxic oxidativestress[J].Mol Interv，2005，54（3）：311-321.
[5]宋少江，徐绥绪，曹颖林.辽东楤木总皂苷降血糖作用研究[J].中药研究与信息，2005，7（5）：7-9.
[6]张广美，王春梅. 楤木属植物及其活性成分药理学研究进展[J].中华中医药学刊，2011，29（8）：1715-1717.
[7]谢海龙，都晓伟，王立娟.中药皂苷类成分防治糖尿病的药理研究进展[J].中医药学报，2006，34（6）：45-47.
[8]马红梅.青海省楤木的开发利用和探讨[J].青海农林科技，2009（4）：37-38.
（收稿日期：2015.08.12）
【关键词】 楤木；链脲佐霉素；丙二醛；超氧化物歧化酶
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0019-02
糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一种以血糖升高为临床表现的代谢性疾病，具有发病率高、病情复杂、病程较长、治愈困难等特点，为终身性疾病。其病理改变常常涉及到全身各个系统，且发病机制尚未完全阐明，缺乏根治性的药物[1]。从天然植物中优选降糖组分，对于防治糖尿病及其并发症有重要的理论指导意义和实际应用价值[2]。
糖尿病患者由于糖代谢紊乱，使得体内的活性氧活力增强，MDA水平升高，SOD活性降低，从而引起氧化应激水平升高。研究发现，氧化应激可造成胰岛细胞功能障碍、胰岛素抵抗，在糖尿病及其并发症的发生、发展过程中起着关键的作用[3-4]。
楤木（Aralia chinensis L）为五加科楤木属植物，在我国大部分地区均有分布[5]。在唐初时期我国就开始用楤木的叶、皮等入药，目前，楤木可用于治疗糖尿病、肾病、胃溃疡等[6]。研究发现，龙牙楤木可使由四氧嘧啶导致的高血糖家兔其血糖值明显降低，具有较好的降糖效果[7]；甘肃省榆中县所产楤木的根皮能明显降低由四氧嘧啶导致的糖尿病大鼠模型的血脂和血糖[8]。青海楤木属于特有种，仅在青海省的循化孟达林区有天然分布，而且是青海省唯一的一種木本蔬菜在西宁市进行人工栽培，有望做为青海省的大量引种对象。温度是影响楤木生长的主要因素，而青藏高原所特有的气候，如昼夜温差大、全年低温时间长、紫外线强等有可能对楤木药用成分、含量或者功效有着重要的影响[9]。因此，研究以青海楤木为研究对象，探讨其降糖作用的有效部位及主要降糖成分筛选，为楤木资源开发提供依据。
1 仪器与材料
1.1 动物 清洁级昆明种小鼠（18～22g）共60只，雄性，购自甘肃兰州大学医学院，合格证号；SCXK（甘）2009-0004。
1.2 药材 楤木采自青海省循化县孟达天然林区，由青海大学医学院中药学教研室鉴定为高原药食两用植物楤木；盐酸二甲双胍（批号：20130731，北京中惠药业有限公司）。
1.3 试剂 链脲佐菌素（批号：CAS#18883-66-4，Sigma公司），用前用0.1 mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.5）配成1%的链脲佐菌素（STZ）溶液；超氧化物歧化酶（批号：20131116，南京建成生物工程研究所）；丙二醛（批号：20131119，南京建成生物工程研究所）。其余试剂均为分析纯。
1.4 仪器 瑞特GM300血糖测定仪；ADVZA2400全自动生化分析仪（西门子）；高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）。
2 实验方法
2.1 青海楤木降血糖部位的提取 称取500g干燥的楤木根皮，经研末后，用6倍体积70%的乙醇进行回流提取，2h/次，共3次，浓缩干燥后得到乙醇粗提取物。然后用水将其溶解，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇来进行萃取，萃取后进行减压回收得不同溶剂提取物。再分别在乙醚和乙酸乙酯的萃取物里加入阿拉伯胶粉5g，研磨均匀。然后再按照植物油∶水∶胶（4∶2∶1）的比例，将其配制成浓度为1g/ml的O/W混悬液。正丁醇的萃取物配成水溶液浓度为1g/ml，将三种溶液全部低温避光保存备用。
2.2 建立糖尿病动物模型 将50只小鼠给予高糖高脂饲料喂养。高糖高脂组成：62.5%普通饲料；10.0%猪油；20.0%蔗糖；5%蛋黄粉；2%胆固醇；0.5%胆酸盐，喂养14d后，连续3d用链脲佐菌素溶液（80 mg·kg-1·d-1）进行腹腔内注射，来诱导小鼠的2型糖尿病模型[2-3]，在造模3d后禁食12h断尾采血检测，其空腹血糖值超过11.0 mmol/L[9]的小鼠认为造模成功。
2.3 分组与给药 将造模成功的50只小鼠随机分5组，每组10只。其中1组为模型组，另外4组分别为阳性组（盐酸二甲双胍0.2g/kg）、楤木正丁醇组、楤木乙酸乙酯组、楤木乙醚组，各组小鼠均每日灌胃1次，连续14d。空白对照组同模型组一样每天灌胃用等量生理盐水。
2.4 血糖指标的检测 给药第14天时将小鼠眼球摘出取血，放置凝后于低温下以3000r/min的转速进行全血离心15min，使血清分离，对MDA和SOD水平进行测定，测定方法完全按照试剂盒说明书进行。另外取小鼠的胸腺和脾脏，称重，并计算其脏器指数。脏器指数（%）=脏器质量（g）/动物质量（g）×100%。
2.5 数据处理 数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析，计量资料采用均数加减标准差（x±s）表示，采用方差分析对多个样本的均数进行比较，采用LSD-t检验进行组间比较，P<0.05表明差异有统计学意义。
3 结果与分析
3.1 青海楤木对小鼠血清SOD活性的影响 与模型组比，楤木不同溶剂萃取物均能使小鼠血清SOD活力有所提高，尤其以正丁醇组较好（P<0.05）。表明楤木不同溶剂萃取物可以增加2型糖尿病小鼠的活性氧清除机制。结果见表1。 3.2 青海楤木对小鼠血清MDA水平的影响 与空白组相比，模型組小鼠的血清中MDA浓度差异具有统计学意义（P<0.05），提示实验小鼠2型糖尿病氧化损伤严重。与模型组比，楤木不同溶剂萃取物均能够降低MDA水平（P<0.05），使其基本恢复至正常水平。表明楤木不同溶剂萃取物有一定缓解氧自由基的损害、抑制脂质过氧化的作用。见表2。
3.3 青海楤木不同溶剂萃取物对小鼠脏器功能的影响 与空白组相比，模型组的2型糖尿病小鼠其脾脏指数与胸腺指数明显降低，表明2型糖尿病可使脾脏与胸腺显著变小，导致免疫功能下降。楤木正丁醇组小鼠的脾脏指数与胸腺指数与模型组相比明显增大（P<0.01），但仍未到达正常水平，显示楤木的提取物能促进糖尿病小鼠胸腺的生长和发育，提高小鼠的免疫能力，从而使糖尿病小鼠的免疫器官和功能得以保护。见表3。
4 讨论
通过高脂高糖饲料喂养小鼠辅助链脲佐菌素（STZ）来建造糖尿病动物模型[6]，给药后各组小鼠的血清MDA水平均有一定程度的降低（P<0.05），血清SOD活力均有所升高 （P<0.05），表明青海楤木不同溶剂萃取物具有一定抗氧化、降血糖作用。
脾脏和胸腺是十分重要的淋巴器官，与免疫功能密切相关，高血糖对脾脏和胸腺生长发育有一定影响。用药后发现，糖尿病小鼠胸腺的生长发育有所促进，可增加其免疫能力，可用来保护糖尿病小鼠的免疫器官。表明青海楤木的正丁醇提取物对糖尿病模型小鼠的免疫器官具有一定的保护作用。
实验研究青海楤木不同溶剂萃取物对2型糖尿病小鼠的SOD和MDA的影响，为青海楤木资源进一步研究提供了基础，对开发青藏高原植物资源具有重大的意义，值得进一步的研究与开发。
参考文献
[1]张晟， 陈祥贵.降血糖植物皂苷研究进展[J].中药材，2007，30（5）：616-620.
[2]洪良健，窦芳，田向荣，等.楤木化学成分的研究[J].中南药学，2012，10（3）： 198-201.
[3]Piro S， Anello M， Di Pietro C， et al. Chronic exposure to free fatty acids or high glucose induces apoptosis in rat pancreatic islets：possible role of oxidative stress[J]. Metabolism， 2002，51（10）：1340-1347.
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[5]宋少江，徐绥绪，曹颖林.辽东楤木总皂苷降血糖作用研究[J].中药研究与信息，2005，7（5）：7-9.
[6]张广美，王春梅. 楤木属植物及其活性成分药理学研究进展[J].中华中医药学刊，2011，29（8）：1715-1717.
[7]谢海龙，都晓伟，王立娟.中药皂苷类成分防治糖尿病的药理研究进展[J].中医药学报，2006，34（6）：45-47.
[8]马红梅.青海省楤木的开发利用和探讨[J].青海农林科技，2009（4）：37-38.
（收稿日期：2015.08.12）