比较肠道病毒71型(EV71)SDLY11株和SDLY107株3D蛋白对细胞的损伤程度。
方法EV71病毒株SDLY11和SDLY107分别取自轻症手足口病患儿和重症手足口病患儿。反转录PCR扩增目的基因11-3D-Flag和107-3D-Flag，分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中，连接产物转化至大肠杆菌DH5α，提取质粒进行酶切和测序鉴定。重组质粒转染人横纹肌肉瘤(RD)细胞，间接免疫荧光试验和蛋白质印迹检测3D蛋白表达，乳酸脱氢酶(LDH)检测3D蛋白导致的细胞损伤，噻唑蓝(MTT)比色法测定3D蛋白对细胞增殖的影响，Annexin-V/Pl双染法测定3D蛋白引起的细胞凋亡。各组间两两比较方差齐采用LSD-t检验，方差不齐采用Dunnett T3检验。
结果反转录PCR扩增获得1 400 bp片段，酶切鉴定重组质粒后分别获得1 400 bp和5 400 bp片段，测定序列与目的基因一致。间接免疫荧光试验观察到特异性荧光，蛋白质印迹显示目的蛋白相对分子质量为55×103。LDH结果显示SDLY11株3D蛋白转染组的吸光度(A)490值高于SDLY107株3D蛋白转染组，分别为0.790±0.048和0.641±0.018，差异有统计学意义(t＝5.14，P<0.05)，SDLY11株3D蛋白引起的细胞膜损伤情况较SDLY107株3D蛋白严重。MTT比色法结果显示SDLY11株3D蛋白转染组的A570值低于SDLY107株3D蛋白转染组，分别为1.028±0.020和1.081±0.002，差异有统计学意义(t＝3.31，P<0.05)，SDLY11株3D蛋白对细胞增殖活性的影响大于SDLY107株3D蛋白。Annexin-V/PI双染法结果显示，SDLY11株3D蛋白转染组和SDLY107株3D蛋白转染组的细胞凋亡百分比分别为(1.471±0.246)%和(1.465±0.237)%，差异无统计学意义(t＝0.04，P＝0.973)。
结论与SDLY11株3D蛋白相比，SDLY107株3D蛋白引起的细胞损伤程度较轻微，且对细胞增殖活性的影响较弱，更有利于病毒在细胞内的复制。