人类表皮生长因子受体-2单链抗体抑制高表达人类表皮生长因子受体-2肿瘤生长

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目的

探讨抗人类表皮生长因子受体-2(Her-2)单链抗体(scFv)抑制高表达Her-2的肿瘤细胞生长增殖,探讨其应用于Her-2阳性肿瘤治疗的可行性。

方法

应用聚合酶链反应(PCR)技术从携带Her-2-scFv片段的质粒pUC57-Her-2-scFv获得目的基因,双酶切法将目的基因Her-2-scFv插入质粒载体pET28a构建表达质粒,转化入Rosetta大肠杆菌诱导表达,获得目的蛋白,并复性、纯化。Western blot证实表达。噻唑蓝(MTT)法检测目的蛋白对肿瘤细胞T6-17增殖的抑制作用。将肿瘤细胞T6-17在裸鼠皮下成瘤,观察抗Her-2单链抗体抑制肿瘤细胞生长。

结果

经基因测序鉴定,重组质粒pET28a-Her-2-scFv构建成功。转化入Rosetta菌表达并分离纯化,可获得纯度约为90%的目的蛋白。MTT法测定发现,抗Her-2-scFv组对T6-17细胞的的生长抑制率为33.52%,曲妥珠单抗治疗组的生长抑制率为34.79%,两组比较差异无统计学意义(P=0.429),而与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P=0.000)。进而检测Her-2-scFv对裸鼠肿瘤模型生长抑制作用发现,Her-2-scFv各浓度治疗组均表现出抑瘤效应,100、250、500 ng/kg组的抑瘤率分别为33.7%、27.2%、63.3%,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P=0.027、0.035、0.000)。赫赛汀组抑瘤率为70.2%,与500 ng/kg组比较,差异无统计学意义(P=0.643)。

结论

抗Her-2单链抗体在体内外均可显著抑制Her-2阳性肿瘤细胞T6-17的生长增殖。

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