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【摘 要】目的：根据通痹合剂舒筋活血、通络止痛等主要功效，对其进行抗炎消肿、止痛、提高免疫力等主要药效学实验研究。结果显示：1.该药对蛋清所致大鼠足跖肿胀有明显消肿作用；2. 能显著降低组胺致炎小鼠毛细血管通透性；3. 能减少由冰醋酸溶液所致小鼠扭体反应次数；4.能抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀；5. 能降低由完全佐剂造成大鼠关节肿胀度并减轻炎症症状，使大鼠胸腺与脾重量增加，且不影响大鼠的体重增长；6.能明显改善关节炎大鼠关节病变组织的损伤。且优于正清风痛灵片，并存在着明显的量效关系.结论：通痹灵合剂对关节炎大鼠有抗炎消肿、止痛、提高免疫力， 改善关节病变组织的损伤等作用。
【关键词】通痹合剂；药效学；关节炎；完全佐剂
【文章编号】1004-7484（2014）07-4315-02
通痹合剂是以治疗风湿及类风湿性关节炎为主的中药制剂，属通痹灵系列剂型之一。此药已在我院临床使用多年，疗效较佳。本实验根据通痹合剂舒筋活血、通络止痛等主要功效，对完全佐剂造成的关节炎大鼠的病变关节组织产生的疼痛、炎症、肿胀、关节组织的损伤等症状，以及对大鼠的增长的影响。进行镇痛、抗炎消肿、增加免疫器官重量和及对关节炎症状组织形态的病理改善，体重检测等药效学实验。了解通痹合剂治疗风湿及类风湿性关节炎的作用机理。
1 材料与方法
1.1材料与方法
1.1.1材料
1.1.1.1动物 清洁级 NIH小鼠，动物合格证号：2001A044。清洁级SD大鼠，动物合格证号： 2001A046。动物购自广东省医学实验动物中心。
1.1.2 药物
1.1.2.1受试药：100%通痹合剂，批号020715，提供单位：广州中医药大学第一附属医院。
1.1.2.2对照药
（1）阳性对照药：正清风痛灵肠溶片，批号0009103，提供单位：湖南正清制药集团股份有限公司。
（2）阴性对照药：生理盐水， 批号020619，提供单位：安徽华源生物药业有限公司。
1.1.2.3药物剂量及给药途径
通痹合剂高剂量组大鼠剂量：100%通痹合剂20ml/kg/体重/日， 低剂量组大鼠剂量：50%通痹合剂20ml/kg/体重/日。高剂量组小鼠剂量： 100%通痹合剂40ml/kg/体重/日，低剂量组小鼠剂量：50%通痹合剂40ml/kg/体重/日。正清风痛灵肠溶片：大鼠剂量：48mg/kg/体重/日。小鼠剂量：100mg/kg/体重/日。生理盐水：等体积。灌胃给药。
1.1.3试剂与仪器
1.1.3.1试剂：酚红液、10%水合氯醛、1.0%伊文思蓝生理盐水溶液（临用前NS新鲜配制），
致炎剂：巴豆油、0.6%醋酸溶液、蛋清、弗氏完全佐剂（adjuvant complete freund，美国Difco产品。）
1.1.3.2仪器：排水法测定体积装置、6010型紫外分光光度仪（ 惠谱上海分析仪器厂）、显微镜、AE-200电子天平（美国）等。
1.2 方法
1.2.1大鼠足跖浮肿试验（蛋清法） [1]
体重180-220g大鼠，共40只，雄性，随机均分4组，每组10只，通痹合剂高剂量组，通痹合剂低剂量组，正清风痛灵片阳性对照组，生理盐水阴性对照组（各组剂量和给药方法参照前述）。预给药四天，每天一次。实验前大鼠麻醉（10%水合氯醛，3ml/kg， ip），测量各组大鼠右后足正常体积（在足正面作一清晰标线），在右后肢足跖皮下注入0.1ml100%新鲜蛋清（即配即用），测定致炎后1、2、4、6h右后肢体积，计算肿胀度。
1.2.2对完全佐剂造成足跖部关节炎大鼠的体重、肿胀度、胸腺与脾重量指数变化的试验[2] ：
体重180-220g大鼠， 共32只，雄性（动物分组及各组剂量和给药方法参照前述）。大鼠每只右后肢足跖皮内注射0.1ml 弗氏完全佐剂致炎，造成关节炎模型，第15天测量大鼠右后肢体积（灌胃前），作为肿胀的初始体积指标。第16天后每组鼠分别按剂量灌胃连续给药21天后处死大鼠，称体重W，测量各组大鼠致炎肢肿胀度（V灌胃后-V灌胃前），摘除并称量脾和胸腺重量，然后做后肢关节病理切片检查（方法见实验结果项）。
1.2.3巴豆油致小鼠耳肿胀试验[3] ：
体重18-22g小鼠，共40只，雄性，随机分4组，每组10只，通痹合剂高剂量组，通痹合剂低剂量组，正清风痛灵片阳性对照组，生理盐水阴性对照组（各组剂量和给药方法参照前述）每天给药1次，连续5d，末次给药后1h，每鼠右耳用2%的巴豆油致炎液（含巴豆油质量分数2%，无水乙醇体积分数20%，蒸馏水5%，乙醚73%）0.1mL致炎.致炎后4h，脱颈椎处死小鼠，沿耳根部位剪下两耳，以内径为6mm的打孔器在两耳的同一部位打下两耳片，在电子天平上称重，以左右耳质量差与左耳质量比计算肿胀率.
1.2.4毛细血管通透性试验（小鼠腹腔色素渗透法）[4]
体重18-22g小鼠，共40只，雄性（动物分组及各组剂量和给药方法参照前述）。预给药5天，每天一次。末次药后1小时小鼠尾静脉注射0.5%伊文氏兰（NS配）0.1ml/10g体重。然后，立刻腹腔注射 0.6%冰醋酸溶液0.2ml/只，20分钟后脱颈椎处死动物，用注射器从腹部注入6ml生理盐水洗涤腹腔，用注射器吸出洗涤液4 ml，再加入生理盐水至10ml，3000rpm离心 30分钟，取上清液于590nm 处测OD值。
1.2.5小鼠扭体法镇痛试验[5]
体重18-22g小鼠，共32只，雄性（动物分组及各组剂量给药方法参照前述）。预给药5天，每天一次。末次给药半小时后，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2ml/20g观察并记录注射致痛剂后20分钟内各小鼠发生扭体反应（腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起）的次数。 3 讨论
通痹合剂是以治疗风湿性及类风湿性关节炎为主的中药制剂，属通痹灵系列剂型之一。此药已在我院临床使用多年，疗效较佳。以往我们曾经多次对通痹灵多种剂型进行过有关临床应用以及对动物的毒理学、药效学、作用机理等方面的实验研究，证明该药与同类药物相比有毒性相对较小，疗效较佳，适用范围广等优点。本次实验结果表明：通痹合剂高剂量组和通痹合剂低剂量组均能显著减轻由完全佐剂造成大鼠关节肿胀和炎症，减轻滑膜病变和软组织炎症，使病变组织趋于正常，还能显著减轻巴豆油、冰醋酸、蛋清等致炎剂引起的肿胀和炎症渗出及疼痛，增加毛细血管通透性，提高免疫器官的重量指数，减轻疼痛，体重正常增长，显示有较强的抗炎消肿、镇痛、提高免疫力作用，作用优于正清风痛灵肠溶片，并存在着明显的对剂量的依赖性。而正清风痛灵肠溶片延缓大鼠体重增长，表明其毒性大于通痹合剂。病理检查结果显示：通痹合剂有较强的抑制病变关节组织的炎症，使关节病变组织趋于正常的能力，同样对剂量存在着一定的依赖性，通痹合剂治疗效果优于正清风痛灵肠溶片。提示：通痹合剂治疗风湿性及类风湿性关节炎的作用机理是通过镇痛、抗炎消肿、提高免疫器官组织胸腺和脾的重量指数、增强免疫功能。上述实验结果也与该药在临床使用时所观察到的实际疗效一致，和已做过的相关的药效学实验研究结果相吻合。本实验再次证明通痹合剂是一种疗效较强的，治疗风湿及类风湿性关节炎的中药制剂。但该药与大多数其它治疗风湿性及类风湿性关节炎的药物一样，有较明显的毒副作用，尤其是对生殖系统的毒性反应最为突出，临床试验显示：治疗剂量的通痹合剂连续服用2-3周后，多数男性病人出现不同程度的精子死亡现象，但停药后即可恢复。我们曾用大鼠对通痹合剂进行生殖系统的毒性反应试验，观察到大鼠经长期服用通痹合剂后毒性蓄积，出现大鼠精子活性降低及大量死亡现象，并随着剂量的增高而毒性增大，但停药3-5天即可恢复正常。虽然与其他常用于治疗风湿性及类风湿性关节炎药物如：甲氨碟呤片、正清风痛灵肠溶片、雷公藤甲甙片、通痹灵片等药物相比毒性要小，但临床使用时依然要慎重。如何降低通痹合剂的毒性，提高疗效有待于我们今后的研究。
参考文献
[1] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.298.
[2] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.305.
[3] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.300.
[4] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.302.
[5] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.353.
作者简介：
邹衍衍，1956.9出生，1983.7江西省中医学院药学系本科毕业，现广州中医药大学第一附属医院实验中心工作，主管药师，从事中药药理与毒理实验研究。
【关键词】通痹合剂；药效学；关节炎；完全佐剂
【文章编号】1004-7484（2014）07-4315-02
通痹合剂是以治疗风湿及类风湿性关节炎为主的中药制剂，属通痹灵系列剂型之一。此药已在我院临床使用多年，疗效较佳。本实验根据通痹合剂舒筋活血、通络止痛等主要功效，对完全佐剂造成的关节炎大鼠的病变关节组织产生的疼痛、炎症、肿胀、关节组织的损伤等症状，以及对大鼠的增长的影响。进行镇痛、抗炎消肿、增加免疫器官重量和及对关节炎症状组织形态的病理改善，体重检测等药效学实验。了解通痹合剂治疗风湿及类风湿性关节炎的作用机理。
1 材料与方法
1.1材料与方法
1.1.1材料
1.1.1.1动物 清洁级 NIH小鼠，动物合格证号：2001A044。清洁级SD大鼠，动物合格证号： 2001A046。动物购自广东省医学实验动物中心。
1.1.2 药物
1.1.2.1受试药：100%通痹合剂，批号020715，提供单位：广州中医药大学第一附属医院。
1.1.2.2对照药
（1）阳性对照药：正清风痛灵肠溶片，批号0009103，提供单位：湖南正清制药集团股份有限公司。
（2）阴性对照药：生理盐水， 批号020619，提供单位：安徽华源生物药业有限公司。
1.1.2.3药物剂量及给药途径
通痹合剂高剂量组大鼠剂量：100%通痹合剂20ml/kg/体重/日， 低剂量组大鼠剂量：50%通痹合剂20ml/kg/体重/日。高剂量组小鼠剂量： 100%通痹合剂40ml/kg/体重/日，低剂量组小鼠剂量：50%通痹合剂40ml/kg/体重/日。正清风痛灵肠溶片：大鼠剂量：48mg/kg/体重/日。小鼠剂量：100mg/kg/体重/日。生理盐水：等体积。灌胃给药。
1.1.3试剂与仪器
1.1.3.1试剂：酚红液、10%水合氯醛、1.0%伊文思蓝生理盐水溶液（临用前NS新鲜配制），
致炎剂：巴豆油、0.6%醋酸溶液、蛋清、弗氏完全佐剂（adjuvant complete freund，美国Difco产品。）
1.1.3.2仪器：排水法测定体积装置、6010型紫外分光光度仪（ 惠谱上海分析仪器厂）、显微镜、AE-200电子天平（美国）等。
1.2 方法
1.2.1大鼠足跖浮肿试验（蛋清法） [1]
体重180-220g大鼠，共40只，雄性，随机均分4组，每组10只，通痹合剂高剂量组，通痹合剂低剂量组，正清风痛灵片阳性对照组，生理盐水阴性对照组（各组剂量和给药方法参照前述）。预给药四天，每天一次。实验前大鼠麻醉（10%水合氯醛，3ml/kg， ip），测量各组大鼠右后足正常体积（在足正面作一清晰标线），在右后肢足跖皮下注入0.1ml100%新鲜蛋清（即配即用），测定致炎后1、2、4、6h右后肢体积，计算肿胀度。
1.2.2对完全佐剂造成足跖部关节炎大鼠的体重、肿胀度、胸腺与脾重量指数变化的试验[2] ：
体重180-220g大鼠， 共32只，雄性（动物分组及各组剂量和给药方法参照前述）。大鼠每只右后肢足跖皮内注射0.1ml 弗氏完全佐剂致炎，造成关节炎模型，第15天测量大鼠右后肢体积（灌胃前），作为肿胀的初始体积指标。第16天后每组鼠分别按剂量灌胃连续给药21天后处死大鼠，称体重W，测量各组大鼠致炎肢肿胀度（V灌胃后-V灌胃前），摘除并称量脾和胸腺重量，然后做后肢关节病理切片检查（方法见实验结果项）。
1.2.3巴豆油致小鼠耳肿胀试验[3] ：
体重18-22g小鼠，共40只，雄性，随机分4组，每组10只，通痹合剂高剂量组，通痹合剂低剂量组，正清风痛灵片阳性对照组，生理盐水阴性对照组（各组剂量和给药方法参照前述）每天给药1次，连续5d，末次给药后1h，每鼠右耳用2%的巴豆油致炎液（含巴豆油质量分数2%，无水乙醇体积分数20%，蒸馏水5%，乙醚73%）0.1mL致炎.致炎后4h，脱颈椎处死小鼠，沿耳根部位剪下两耳，以内径为6mm的打孔器在两耳的同一部位打下两耳片，在电子天平上称重，以左右耳质量差与左耳质量比计算肿胀率.
1.2.4毛细血管通透性试验（小鼠腹腔色素渗透法）[4]
体重18-22g小鼠，共40只，雄性（动物分组及各组剂量和给药方法参照前述）。预给药5天，每天一次。末次药后1小时小鼠尾静脉注射0.5%伊文氏兰（NS配）0.1ml/10g体重。然后，立刻腹腔注射 0.6%冰醋酸溶液0.2ml/只，20分钟后脱颈椎处死动物，用注射器从腹部注入6ml生理盐水洗涤腹腔，用注射器吸出洗涤液4 ml，再加入生理盐水至10ml，3000rpm离心 30分钟，取上清液于590nm 处测OD值。
1.2.5小鼠扭体法镇痛试验[5]
体重18-22g小鼠，共32只，雄性（动物分组及各组剂量给药方法参照前述）。预给药5天，每天一次。末次给药半小时后，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2ml/20g观察并记录注射致痛剂后20分钟内各小鼠发生扭体反应（腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起）的次数。 3 讨论
通痹合剂是以治疗风湿性及类风湿性关节炎为主的中药制剂，属通痹灵系列剂型之一。此药已在我院临床使用多年，疗效较佳。以往我们曾经多次对通痹灵多种剂型进行过有关临床应用以及对动物的毒理学、药效学、作用机理等方面的实验研究，证明该药与同类药物相比有毒性相对较小，疗效较佳，适用范围广等优点。本次实验结果表明：通痹合剂高剂量组和通痹合剂低剂量组均能显著减轻由完全佐剂造成大鼠关节肿胀和炎症，减轻滑膜病变和软组织炎症，使病变组织趋于正常，还能显著减轻巴豆油、冰醋酸、蛋清等致炎剂引起的肿胀和炎症渗出及疼痛，增加毛细血管通透性，提高免疫器官的重量指数，减轻疼痛，体重正常增长，显示有较强的抗炎消肿、镇痛、提高免疫力作用，作用优于正清风痛灵肠溶片，并存在着明显的对剂量的依赖性。而正清风痛灵肠溶片延缓大鼠体重增长，表明其毒性大于通痹合剂。病理检查结果显示：通痹合剂有较强的抑制病变关节组织的炎症，使关节病变组织趋于正常的能力，同样对剂量存在着一定的依赖性，通痹合剂治疗效果优于正清风痛灵肠溶片。提示：通痹合剂治疗风湿性及类风湿性关节炎的作用机理是通过镇痛、抗炎消肿、提高免疫器官组织胸腺和脾的重量指数、增强免疫功能。上述实验结果也与该药在临床使用时所观察到的实际疗效一致，和已做过的相关的药效学实验研究结果相吻合。本实验再次证明通痹合剂是一种疗效较强的，治疗风湿及类风湿性关节炎的中药制剂。但该药与大多数其它治疗风湿性及类风湿性关节炎的药物一样，有较明显的毒副作用，尤其是对生殖系统的毒性反应最为突出，临床试验显示：治疗剂量的通痹合剂连续服用2-3周后，多数男性病人出现不同程度的精子死亡现象，但停药后即可恢复。我们曾用大鼠对通痹合剂进行生殖系统的毒性反应试验，观察到大鼠经长期服用通痹合剂后毒性蓄积，出现大鼠精子活性降低及大量死亡现象，并随着剂量的增高而毒性增大，但停药3-5天即可恢复正常。虽然与其他常用于治疗风湿性及类风湿性关节炎药物如：甲氨碟呤片、正清风痛灵肠溶片、雷公藤甲甙片、通痹灵片等药物相比毒性要小，但临床使用时依然要慎重。如何降低通痹合剂的毒性，提高疗效有待于我们今后的研究。
参考文献
[1] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.298.
[2] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.305.
[3] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.300.
[4] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.302.
[5] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M]. 第1版. 北京：人民卫生出版社出版，1991.353.
作者简介：
邹衍衍，1956.9出生，1983.7江西省中医学院药学系本科毕业，现广州中医药大学第一附属医院实验中心工作，主管药师，从事中药药理与毒理实验研究。