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（1.沧州医学高等专科学校，河北沧州061001;2.河北医科大学，河北石家庄050001）
摘要：目的：观察发酵型黄芪制剂“芪酵粉”（FAP）对环磷酰胺（CTX）模型小鼠造血系统、免疫功能和肝肾功能的影响，探索临床上更经济有效的抗癌化疗辅助用药。方法：给小鼠腹腔注射CTX建立骨髓抑制、免疫损伤模型，观察FAP对大剂量CTX所致小鼠骨髓抑制、免疫器官萎缩、肾功能损伤等毒性反应的对抗作用。结果：FAP可对抗CTX所致小鼠外周血白细胞减少、骨髓有核细胞数减少和脾重减轻等毒性反应，保护肾功能，对肝功能无明显影响。结论：FAP对肿瘤化疗药物CTX有减毒作用。
关键词：芪酵粉;环磷酰胺;模型鼠;减毒作用
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）10-0043-03
化疗是目前恶性肿瘤治疗的主要手段之一，然而多数化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常人体细胞也有较大的损伤，尤其是增殖旺盛的骨髓造血细胞及胃肠道细胞。而严重的骨髓造血功能细胞损伤会引起外周白血细胞过低，使患者被迫中止治疗。另一方面抗癌化疗药物常常使患者的免疫功能下降，疗效降低。因此减轻化疗药的毒副反应，改善机体骨髓造血功能和免疫功能的实验研究，受到肿瘤研究工作者的普遍重视。芪酵粉（FermentedAstragalusmembranaceusPowder，FAP）系采用中药黄芪（Astragalusmembranaceus）经液体深层发酵后低温干燥并进行破壁处理而制得的棕色粉末。近年来，黄芪及其复方的对肿瘤化疗药物的增效和减毒作用颇受重视，但黄芪发酵产品对化疗药物的减毒作用尚未见报道。本研究通过给小鼠腹腔注射环磷酰胺（CTX）建立骨髓抑制、免疫损伤模型，观察FAP对大剂量CTX所致小鼠骨髓抑制、免疫器官萎缩、肾功能损伤等毒性反应的对抗作用，为临床应用中药防治化疗毒副反应提供实验依据。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1药品与试剂
芪酵粉为棕褐色粉末，系由中药黄芪经液体深层发酵后低温干燥，并进行破壁处理而制得。每克干粉相当于黄芪0.92g。实验前以蒸馏水配成5%、10%和20%悬液备用，用前摇匀。环磷酰胺粉针剂200mg/支，上海华联制药公司生产，用灭菌生理盐水稀释后放冰箱内保存备用，一周有效。谷丙转氨酶(ALT)测定试剂盒、尿素氮（BUN）测定试剂盒购自石家庄市制剂厂。
1.1.2动物
昆明（KM）种小鼠，雌雄各半，健康，6~8周龄，体重18~22g，河北医科大学实验动物中心提供，置于室温22±2℃、相对湿度40%~60%的实验室中进行实验。
1.1.3主要仪器
ECOM-F6124型半自动生化测定仪,德国Eppendoff公司生产。AC-9000型全自动血细胞计数仪，广州倍肯科技实业有限公司生产。
1.2实验方法
1.2.1分组及给药［1,2］
选用昆明种小鼠若干，随机分5组，分别为正常对照组（Control）、CTX造型组（CTX）、CTX加FAP低、中、高剂量组（FAPL、FAPM、FAPH）。从实验第1天开始，第3～5组分别给予FAP灌胃（ig），剂量分别为1g•kg-1、2g•kg-1和4g•kg-1，每日1次，连续10d。正常对照组和CTX组均ig等容积蒸馏水（0.2mL/10g体重）。同时，除正常对照组外，其余4组均于实验第7天给予CTX100mg•kg-1腹腔注射（ip），连续3d，以制作小鼠骨髓抑制、肝肾功能损害、免疫损伤模型。
1.2.2取材及指标检测
于末次给CTX后3d，摘眼球取血，按常规测外周血WBC、RBC和HGB，分离血清测定ALT和BUN。随后处死小鼠，剥离小鼠右股骨，提取骨髓，计数骨髓有核细胞［3］，记录骨髓有核细胞数/骨髓细胞总数（N/T）。摘取脾脏、胸腺，分析天平称湿重，计算脾指数和胸腺指数。
脾指数=脾重量（mg）/体重（10g）；胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（10g）。
1.3统计方法
采用SPSS统计分析软件进行统计学分析，实验数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，多个实验组与对照组的比较采用LSD法。以α=0.05为检验水准，以双侧P＜0.05为具有统计学意义。
由表1可见：FAP高剂量与CTX合用外周血WBC与CTX组比较，明显升高，差异有显著性（P＜0.01）；FAP中、高剂量与CTX合用骨髓有核细胞数/总细胞数与CTX组比较明显升高（P＜0.05、P＜0.01）。表明FAP对CTX所致小鼠外周白血细胞减少和骨髓有核细胞数减少有显著对抗作用。
2.2FAP对小鼠血清ALT和BUN的影响
FAP对CTX造型小鼠血清ALT和BUN的影响结果见表2。
表2FAP对CTX造型小鼠血清ALT和BUN的影响
由表2可见：FAP低、中、高剂量与CTX合用血清BUN与CTX组比较均明显降低（P＜0.01）；小鼠血清ALT各组间无显著性差异（P＞0.05）。表明FAP对CTX所致小鼠血BUN含量增高有明显对抗作用，对小鼠血清ALT无明显影响。
2.3FAP对CTX所致小鼠免疫器官萎缩的影响
FAP对CTX所致小鼠免疫器官萎缩的影响结果见表3。
由表3可见：FAP高剂量组脾指数与CTX组比较有显著性差异（P＜0.05）；胸腺指数各组间无显著性差异（P＞0.05）。表明FAP对CTX致脾脏萎缩有明显对抗作用，对CTX所致胸腺萎缩无明显影响。
3讨论
环磷酰胺为临床广泛应用的广谱抗肿瘤药物，然而该药属于细胞周期非特异性药物，在杀伤肿瘤细胞的同时，机体正常细胞也受到损伤，产生骨髓抑制、消化道反应、免疫抑制、肝、肾损伤等毒副反应。而且环磷酰胺的剂量越大，其毒性作用也越强。环磷酰胺的这种特点极大地限制了它的使用剂量和使用时间，从而影响其使用效果。
表3FAP对CTX所致小鼠免疫器官萎缩的影响(x±s)
近年来研究表明，中医药在防治肿瘤化疗所致的毒副反应方面显示了其特有的优势。中医对化疗毒副反应的治疗主要以扶正培本为主，多运用补气养血、健脾和胃和滋补肝肾等治疗原则进行治疗。中医药的应用，不仅可减少或中和抗肿瘤药物对人体的毒性，而且能增强机体免疫机能，改善体内代谢水平、纠正人体的功能紊乱，提高机体的抗癌能力，以达到扶正消瘤的目的。从传统的中药中筛选生物反应调节剂，并用现代的科学方法将其研制成肿瘤化疗新的中药增效、减毒剂已成为目前抗恶性肿瘤研究的重要课题。
芪酵粉为中药黄芪经现代科学方法研制成的一种棕褐色粉末。黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，其味甘、性微温，中医认为其具有补气升阳、固表止汗、消肿生肌的功能。现代研究证实：黄芪含有多种有效成分,具有提高人体免疫功能，保护骨髓和肾上腺皮质功能，与化疗同用可起到增效减毒作用［4］。黄芪及其复方在临床上对抗肿瘤化疗引起的毒副反应取得较好的疗效［5~7］。动物实验也表明，黄芪对环磷酰胺所致骨髓造血功能损害有明显保护作用，并可逆转环磷酰胺对免疫功能的抑制现象［8］。
本实验用黄芪发酵产品“芪酵粉”与环磷酰胺联合应用也出现了与上述类似的减毒作用。实验结果表明，芪酵粉可对抗环磷酰胺所致的小鼠外周血白细胞减少、骨髓有核细胞数减少和脾重减轻等毒性反应，保护肾功能，对化疗药环磷酰胺有显著的减毒作用。
中药发酵是现代中药研究的热点。有研究发现，某些中药经微生物发酵技术处理后，其免疫增强作用明显优于传统煎剂，化疗减毒作用也比传统煎剂强［9］。本实验结果显示，黄芪发酵产品FAP4g•kg-1（相当于黄芪3.68g•kg-1）给小鼠灌胃10d，即对环磷酰胺有显著的增效减毒作用，而文献报道中，应用黄芪水煎液与环磷酰胺合用产生增效和减毒作用的给药剂量为75g•kg-1［10］，提示黄芪经发酵技术处理后，其化疗增效和减毒作用可能比传统煎剂强。该制剂性质稳定、便于保存、价廉易得，有可能作为一种理想的化疗辅助用药，降低化疗药的毒副反应，提高疗效，值得进一步开发研究。
参考文献：
［1］王玉璞，王志涛，黄正良，等．癌化液对荷瘤动物化疗增效和减毒作用的实验研究［J］．中药药理与临床，2000，16（2）：21-22.
［2］皋聪，曹于平，孙继红，等．养正合剂在抗肿瘤治疗中的减毒作用［J］．中国药科大学学报，1994，25（6）：357-360.
［3］刘韧，谢振家．阿多扶正霖对抗癌药的一些毒副反应的减毒作用研究［J］．海峡药学，1997，9（1）：28-30.
［4］李黎．黄芪在肿瘤化疗中的增效减毒作用［J］．实用中医内科，2007，21（1）：27-29.［5］段萍，王再谟．黄芪在恶性肿瘤化疗中的增效减毒作用的临床研究［J］．中国中西医结合，2002，22（7）：515-517.
［6］周坚，刘时觉，林建武．黄芪注射液对肿瘤化疗减毒作用的临床观察［J］．浙江中医杂志，2007，42（3）：179-180.
［7］刘海晔，周洁．注射用黄芪多糖联合化疗减毒增效96例临床观察［J］．天津药学，2007，19（2）：31-33.
［8］哈敏文，李振，何安光．黄芪合剂防止化疗性骨髓抑制的实验研究［J］．中国医科大学学报，1997，26（5）：449-452.
［9］董玫，郭芳，刘秀书，等．六味地黄发酵液的抗瘤和减毒作用［J］．现代中西医结合，2002，11（18）：1753-1754.
［10］全宏勋．黄芪水煎液对环磷酰胺抗肿瘤活性与毒性的影响［J］．中药材，1995，8（7）：356.
（责任编辑：王尚勇）
摘要：目的：观察发酵型黄芪制剂“芪酵粉”（FAP）对环磷酰胺（CTX）模型小鼠造血系统、免疫功能和肝肾功能的影响，探索临床上更经济有效的抗癌化疗辅助用药。方法：给小鼠腹腔注射CTX建立骨髓抑制、免疫损伤模型，观察FAP对大剂量CTX所致小鼠骨髓抑制、免疫器官萎缩、肾功能损伤等毒性反应的对抗作用。结果：FAP可对抗CTX所致小鼠外周血白细胞减少、骨髓有核细胞数减少和脾重减轻等毒性反应，保护肾功能，对肝功能无明显影响。结论：FAP对肿瘤化疗药物CTX有减毒作用。
关键词：芪酵粉;环磷酰胺;模型鼠;减毒作用
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）10-0043-03
化疗是目前恶性肿瘤治疗的主要手段之一，然而多数化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常人体细胞也有较大的损伤，尤其是增殖旺盛的骨髓造血细胞及胃肠道细胞。而严重的骨髓造血功能细胞损伤会引起外周白血细胞过低，使患者被迫中止治疗。另一方面抗癌化疗药物常常使患者的免疫功能下降，疗效降低。因此减轻化疗药的毒副反应，改善机体骨髓造血功能和免疫功能的实验研究，受到肿瘤研究工作者的普遍重视。芪酵粉（FermentedAstragalusmembranaceusPowder，FAP）系采用中药黄芪（Astragalusmembranaceus）经液体深层发酵后低温干燥并进行破壁处理而制得的棕色粉末。近年来，黄芪及其复方的对肿瘤化疗药物的增效和减毒作用颇受重视，但黄芪发酵产品对化疗药物的减毒作用尚未见报道。本研究通过给小鼠腹腔注射环磷酰胺（CTX）建立骨髓抑制、免疫损伤模型，观察FAP对大剂量CTX所致小鼠骨髓抑制、免疫器官萎缩、肾功能损伤等毒性反应的对抗作用，为临床应用中药防治化疗毒副反应提供实验依据。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1药品与试剂
芪酵粉为棕褐色粉末，系由中药黄芪经液体深层发酵后低温干燥，并进行破壁处理而制得。每克干粉相当于黄芪0.92g。实验前以蒸馏水配成5%、10%和20%悬液备用，用前摇匀。环磷酰胺粉针剂200mg/支，上海华联制药公司生产，用灭菌生理盐水稀释后放冰箱内保存备用，一周有效。谷丙转氨酶(ALT)测定试剂盒、尿素氮（BUN）测定试剂盒购自石家庄市制剂厂。
1.1.2动物
昆明（KM）种小鼠，雌雄各半，健康，6~8周龄，体重18~22g，河北医科大学实验动物中心提供，置于室温22±2℃、相对湿度40%~60%的实验室中进行实验。
1.1.3主要仪器
ECOM-F6124型半自动生化测定仪,德国Eppendoff公司生产。AC-9000型全自动血细胞计数仪，广州倍肯科技实业有限公司生产。
1.2实验方法
1.2.1分组及给药［1,2］
选用昆明种小鼠若干，随机分5组，分别为正常对照组（Control）、CTX造型组（CTX）、CTX加FAP低、中、高剂量组（FAPL、FAPM、FAPH）。从实验第1天开始，第3～5组分别给予FAP灌胃（ig），剂量分别为1g•kg-1、2g•kg-1和4g•kg-1，每日1次，连续10d。正常对照组和CTX组均ig等容积蒸馏水（0.2mL/10g体重）。同时，除正常对照组外，其余4组均于实验第7天给予CTX100mg•kg-1腹腔注射（ip），连续3d，以制作小鼠骨髓抑制、肝肾功能损害、免疫损伤模型。
1.2.2取材及指标检测
于末次给CTX后3d，摘眼球取血，按常规测外周血WBC、RBC和HGB，分离血清测定ALT和BUN。随后处死小鼠，剥离小鼠右股骨，提取骨髓，计数骨髓有核细胞［3］，记录骨髓有核细胞数/骨髓细胞总数（N/T）。摘取脾脏、胸腺，分析天平称湿重，计算脾指数和胸腺指数。
脾指数=脾重量（mg）/体重（10g）；胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（10g）。
1.3统计方法
采用SPSS统计分析软件进行统计学分析，实验数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，多个实验组与对照组的比较采用LSD法。以α=0.05为检验水准，以双侧P＜0.05为具有统计学意义。
由表1可见：FAP高剂量与CTX合用外周血WBC与CTX组比较，明显升高，差异有显著性（P＜0.01）；FAP中、高剂量与CTX合用骨髓有核细胞数/总细胞数与CTX组比较明显升高（P＜0.05、P＜0.01）。表明FAP对CTX所致小鼠外周白血细胞减少和骨髓有核细胞数减少有显著对抗作用。
2.2FAP对小鼠血清ALT和BUN的影响
FAP对CTX造型小鼠血清ALT和BUN的影响结果见表2。
表2FAP对CTX造型小鼠血清ALT和BUN的影响
由表2可见：FAP低、中、高剂量与CTX合用血清BUN与CTX组比较均明显降低（P＜0.01）；小鼠血清ALT各组间无显著性差异（P＞0.05）。表明FAP对CTX所致小鼠血BUN含量增高有明显对抗作用，对小鼠血清ALT无明显影响。
2.3FAP对CTX所致小鼠免疫器官萎缩的影响
FAP对CTX所致小鼠免疫器官萎缩的影响结果见表3。
由表3可见：FAP高剂量组脾指数与CTX组比较有显著性差异（P＜0.05）；胸腺指数各组间无显著性差异（P＞0.05）。表明FAP对CTX致脾脏萎缩有明显对抗作用，对CTX所致胸腺萎缩无明显影响。
3讨论
环磷酰胺为临床广泛应用的广谱抗肿瘤药物，然而该药属于细胞周期非特异性药物，在杀伤肿瘤细胞的同时，机体正常细胞也受到损伤，产生骨髓抑制、消化道反应、免疫抑制、肝、肾损伤等毒副反应。而且环磷酰胺的剂量越大，其毒性作用也越强。环磷酰胺的这种特点极大地限制了它的使用剂量和使用时间，从而影响其使用效果。
表3FAP对CTX所致小鼠免疫器官萎缩的影响(x±s)
近年来研究表明，中医药在防治肿瘤化疗所致的毒副反应方面显示了其特有的优势。中医对化疗毒副反应的治疗主要以扶正培本为主，多运用补气养血、健脾和胃和滋补肝肾等治疗原则进行治疗。中医药的应用，不仅可减少或中和抗肿瘤药物对人体的毒性，而且能增强机体免疫机能，改善体内代谢水平、纠正人体的功能紊乱，提高机体的抗癌能力，以达到扶正消瘤的目的。从传统的中药中筛选生物反应调节剂，并用现代的科学方法将其研制成肿瘤化疗新的中药增效、减毒剂已成为目前抗恶性肿瘤研究的重要课题。
芪酵粉为中药黄芪经现代科学方法研制成的一种棕褐色粉末。黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，其味甘、性微温，中医认为其具有补气升阳、固表止汗、消肿生肌的功能。现代研究证实：黄芪含有多种有效成分,具有提高人体免疫功能，保护骨髓和肾上腺皮质功能，与化疗同用可起到增效减毒作用［4］。黄芪及其复方在临床上对抗肿瘤化疗引起的毒副反应取得较好的疗效［5~7］。动物实验也表明，黄芪对环磷酰胺所致骨髓造血功能损害有明显保护作用，并可逆转环磷酰胺对免疫功能的抑制现象［8］。
本实验用黄芪发酵产品“芪酵粉”与环磷酰胺联合应用也出现了与上述类似的减毒作用。实验结果表明，芪酵粉可对抗环磷酰胺所致的小鼠外周血白细胞减少、骨髓有核细胞数减少和脾重减轻等毒性反应，保护肾功能，对化疗药环磷酰胺有显著的减毒作用。
中药发酵是现代中药研究的热点。有研究发现，某些中药经微生物发酵技术处理后，其免疫增强作用明显优于传统煎剂，化疗减毒作用也比传统煎剂强［9］。本实验结果显示，黄芪发酵产品FAP4g•kg-1（相当于黄芪3.68g•kg-1）给小鼠灌胃10d，即对环磷酰胺有显著的增效减毒作用，而文献报道中，应用黄芪水煎液与环磷酰胺合用产生增效和减毒作用的给药剂量为75g•kg-1［10］，提示黄芪经发酵技术处理后，其化疗增效和减毒作用可能比传统煎剂强。该制剂性质稳定、便于保存、价廉易得，有可能作为一种理想的化疗辅助用药，降低化疗药的毒副反应，提高疗效，值得进一步开发研究。
参考文献：
［1］王玉璞，王志涛，黄正良，等．癌化液对荷瘤动物化疗增效和减毒作用的实验研究［J］．中药药理与临床，2000，16（2）：21-22.
［2］皋聪，曹于平，孙继红，等．养正合剂在抗肿瘤治疗中的减毒作用［J］．中国药科大学学报，1994，25（6）：357-360.
［3］刘韧，谢振家．阿多扶正霖对抗癌药的一些毒副反应的减毒作用研究［J］．海峡药学，1997，9（1）：28-30.
［4］李黎．黄芪在肿瘤化疗中的增效减毒作用［J］．实用中医内科，2007，21（1）：27-29.［5］段萍，王再谟．黄芪在恶性肿瘤化疗中的增效减毒作用的临床研究［J］．中国中西医结合，2002，22（7）：515-517.
［6］周坚，刘时觉，林建武．黄芪注射液对肿瘤化疗减毒作用的临床观察［J］．浙江中医杂志，2007，42（3）：179-180.
［7］刘海晔，周洁．注射用黄芪多糖联合化疗减毒增效96例临床观察［J］．天津药学，2007，19（2）：31-33.
［8］哈敏文，李振，何安光．黄芪合剂防止化疗性骨髓抑制的实验研究［J］．中国医科大学学报，1997，26（5）：449-452.
［9］董玫，郭芳，刘秀书，等．六味地黄发酵液的抗瘤和减毒作用［J］．现代中西医结合，2002，11（18）：1753-1754.
［10］全宏勋．黄芪水煎液对环磷酰胺抗肿瘤活性与毒性的影响［J］．中药材，1995，8（7）：356.
（责任编辑：王尚勇）