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目的 为研究成纤维细胞基因转染的可行性创造条件,从而为转化生长因子(TGF)β3转基因治疗创面与病理性瘢痕的研究奠定基础.方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3.1(一)-hTGFβ3真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM 2000介导质粒转染NIH3T3细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTGFβ3 mRNA在真核细胞中的表达.结果重组真核表达载体pcDNA 3.1(-)-hTGFβ3经限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ酶切,电泳后显示1 253 bp的hTGFβ3目的片段和5.40kb的pcDNA 3.1(-)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ3全长序列相同,证实pcDNA3.1(-)-hTGFβ3真核表达载体构建成功,经RT-PCR检测了hTGF83在转录水平mRNA的表达情况,表明质粒转染NIH3T3细胞后hTGFβ3 mRNA的表达明显增强.结论重组真核表达载体构建正确,并能在NIH3T3成纤维细胞中表达hTGFFβ3mRNA,为其在创面与病理性瘢痕的转基因治疗奠定了基础。