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目的
检测微小RNA(miRNA,miR)-20a在替莫唑胺(TMZ)耐药的胶质瘤细胞株中的表达,探讨胶质瘤产生TMZ耐药的机制。
方法通过浓度梯度递增法建立人脑胶质瘤TMZ耐药模型细胞株,并命名U251/TMZ。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞株中miR-20a的表达。Western blot技术检测细胞株中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号及其下游信号的磷酸化。对U251/TMZ细胞株转染miR-20a inhibitor,并检测其细胞存活率、miR-20a表达及mTOR信号通路磷酸化。
结果与U251细胞株比较,U251/TMZ细胞株中miR-20a的表达水平明显升高(2.28±0.18比1.03±0.05,P<0.05),同时mTOR通路的磷酸化水平也升高。并且抑制miR-20a表达后,U251/TMZ细胞株的细胞存活率明显下降(P<0.01),mTOR信号通路的磷酸化水平下降。
结论miR-20a的表达可能与胶质瘤细胞对TMZ的耐药性相关,其可能通过mTOR信号通路发挥作用。