【摘 要】
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海栖热袍菌(Thermotoga maritima)是嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的葡萄糖异构酶由于其出色的耐热性有着潜在的工业应用价值。由于海栖热袍菌苛刻的培养条件导致其葡萄糖异构
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室,南京师范大学生命科学学院
【基金项目】
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江苏省自然科学基金项目(No.BK2006220)
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海栖热袍菌(Thermotoga maritima)是嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的葡萄糖异构酶由于其出色的耐热性有着潜在的工业应用价值。由于海栖热袍菌苛刻的培养条件导致其葡萄糖异构酶产量较低。通过PCR方法克隆编码T.maritima MSB8葡萄糖异构酶基因xylA,构建重组质粒pHsh-xylA,转入Escherichia coli JM109,通过热激诱导表达。通过热处理和离子交换层析纯化两步得到电泳纯的酶制品,纯化倍数和回收率分别为8.02和49.02。对酶学性质研究表明,该重组酶为金属离子激活性酶,Mg2+,Co2+对相对酶活有很强的激活作用,其最适pH为7.0,最适反应温度为95°C,且在pH6~8之间有着较好的稳定性,在95°C下半衰期长达5h以上。以葡萄糖为底物时的表观Km和Vmax分别为105mmol/L和45.2mol/min·mg。
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