【摘 要】
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为了研究国内分离的首株E种肠道病毒HY12毒株的非结构蛋白3C的功能,本研究以设计合成非结构蛋白3C的特异性引物,PCR扩增出3C的基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中
【机 构】
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吉林大学动物医学学院教育部人兽共患病研究重点实验室,吉林长春130062
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为了研究国内分离的首株E种肠道病毒HY12毒株的非结构蛋白3C的功能,本研究以设计合成非结构蛋白3C的特异性引物,PCR扩增出3C的基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒.将构建的阳性质粒转化到大肠杆菌菌株BL21中,以IPTG诱导表达3C重组蛋白及应用尿素纯化包涵体的方法纯化重组蛋白.以纯化的3C蛋白作为免疫原免疫6周龄健康的BALB/c小鼠,经3次免疫后,采集其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经过筛选和亚克隆等过程获得能够稳定表达3C单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株.应用鼠单克隆亚型鉴定试剂盒鉴定出该杂交瘤细胞株所分泌的抗体类型为IgM.以过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接ELISA试验鉴定该单克隆抗体的反应原性和特异性,结果表明本试验获得了 HY12非结构蛋白3C的单克隆抗体能够特异性检测出牛肠道病毒抗原,为进一步研究E种肠道病毒非结构蛋白3C的功能奠定了基础.
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