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【摘要】本文以高效液相色谱法测定乳制品中的苯甲酸、山梨酸前处理为例,研究了几种沉淀乳品中蛋白质等干扰物质的方法,发现亚铁氰化钾-乙酸锌沉淀法和无水乙醇处理法效果较好,出峰无干扰,定量准确性好,处理方法简单快速,对色谱柱及检验人员影响小,可用于乳饮料及乳制品的日常检测。
【关键词】乳制品;高效液相色谱;沉淀蛋白
目前市场上各类乳制品越来越多的得到人们的青睐,由于其含有丰富的蛋白质、糖类及多种维生素,已成为人们的首选饮品。消费市场也越来越庞大。一般这些乳制品中都要添加一些防腐剂来抑制微生物的生长和繁殖,以延长食品的保存时间。
我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种,苯甲酸和山梨酸是食品中两种最常用的防腐剂,故本文以此为例。由于目前使用的防腐剂大多是人工合成的,超标使用会对人体造成一定损害。苯甲酸不仅能破坏人体线粒体DNA的一个重要区域,用量过多还会对人体肝脏产生危害,甚至致癌。与苯甲酸相比,山梨酸毒性弱得多,而且在相同酸度值下抑菌能力比苯甲酸高两倍多,对食品口味亦无不良影响,因此许多国家使用山梨酸及其钾盐作为防腐剂。目前各国都在提倡绿色消费,消费者也越来越关注新型的天然防腐剂,厂家也开始逐步地选择一些如葡萄糖、氧化酶、鱼精蛋白、溶菌酶、乳酸菌、壳聚糖、果胶分解物等新型防腐剂。但因苯甲酸及其钠盐价格低廉,在我国仍是主要的防腐剂,主要用于饮料、酱油醋等调味品及酱腌菜等。
我国规定原乳及成品巴氏乳中苯甲酸和山梨酸均不得检出,乳饮料中苯甲酸不得检出,山梨酸的含量均不得超过0.5g/kg,检测苯甲酸一般采用气相色谱法和液相色谱法,气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强,且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大,使标准系列线性差,最低检出限较高。对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测,而液相色谱法样品处理相对简单。另外,高效液相色谱因采用高压输液泵和小顆粒的填料,与经典的液相色谱相比具有很高的柱和分离能力。为此 , 常规检测苯甲酸均采用HPLC方法。
然而乳制品中往往含有大量的油脂、蛋白质,对提取极为不利;如处理不干净也会污染色谱柱,影响检测工作。这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂,尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质,且不影响待测物组分的回收率。经过反复试验比较, 结果如下:
1、GB/T5009.29-2003使用5%硫酸铜溶液沉淀蛋白,对于蛋白质含量较低的食品尚可,对于乳制品等高脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
2、GB/T22400-2008中使用乙腈做沉淀剂,效果一般,处理后样品放置一段时间后又变浑浊,杂峰较多,对色谱柱有一定损害,需定期更换预柱,且接触有机试剂,对实验人员有一定危害。
3、用10%亚铁氰化钾溶液和20%醋酸锌溶液,效果较理想,操作简便。但亚铁氰化钾在紫外检测器下吸收峰强,个别仪器产生的色谱峰拖尾影响测定,实践中发现对个别色谱柱有一定影响,需定期更换预柱。
4、使用无水乙醇水浴沉淀,效果很好,无需接触有机试剂,对色谱柱无损伤,操作较简便。
其中方法4为本实验室在实践中摸索得出,具体方法为:称取10g样品与50ml离心管中,加入20ml无水乙醇,以水定容,75℃水浴15分钟,8000转以上/分钟离心5分钟,取上清液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中,样品处理液和标准溶液各进样5uL测定。
综上所述,亚铁氰化钾-乙酸锌沉淀法与无水乙醇处理法均在实际试验前处理中有较好效果,出峰无干扰,定量准确性好,处理方法简单快速,对色谱柱及检验人员影响小,可用于乳饮料及乳制品的日常检测。各实验室可根据自身仪器状况及实验条件自行选择适合的方法,以期在实际应用中优化试验结果。
参考文献
[1]GB/T 5009 29-2003 食品中山梨酸,苯甲酸的测定方法
[2]GB/T22400-2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法
[3]GB2760-2007 食品添加剂使用卫生标准
[4]卢丽明.含乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠测定的样品前处理方法探讨中图分类号:TS275. 4 文献标识码:B 文章编号: 1671 - 5039(2005) 06 - 0043 – 02
[5]祝伟霞.高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸 2005 年10 月第28 卷第5 期Chinese Frontier Health Quarantine Oct . 2005 , Vol 28 , No. 5
作者简介:杨青青(1982-),女,汉族,黑龙江齐齐哈尔人,毕业于哈尔滨商业大学食品科学与工程专业
【关键词】乳制品;高效液相色谱;沉淀蛋白
目前市场上各类乳制品越来越多的得到人们的青睐,由于其含有丰富的蛋白质、糖类及多种维生素,已成为人们的首选饮品。消费市场也越来越庞大。一般这些乳制品中都要添加一些防腐剂来抑制微生物的生长和繁殖,以延长食品的保存时间。
我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种,苯甲酸和山梨酸是食品中两种最常用的防腐剂,故本文以此为例。由于目前使用的防腐剂大多是人工合成的,超标使用会对人体造成一定损害。苯甲酸不仅能破坏人体线粒体DNA的一个重要区域,用量过多还会对人体肝脏产生危害,甚至致癌。与苯甲酸相比,山梨酸毒性弱得多,而且在相同酸度值下抑菌能力比苯甲酸高两倍多,对食品口味亦无不良影响,因此许多国家使用山梨酸及其钾盐作为防腐剂。目前各国都在提倡绿色消费,消费者也越来越关注新型的天然防腐剂,厂家也开始逐步地选择一些如葡萄糖、氧化酶、鱼精蛋白、溶菌酶、乳酸菌、壳聚糖、果胶分解物等新型防腐剂。但因苯甲酸及其钠盐价格低廉,在我国仍是主要的防腐剂,主要用于饮料、酱油醋等调味品及酱腌菜等。
我国规定原乳及成品巴氏乳中苯甲酸和山梨酸均不得检出,乳饮料中苯甲酸不得检出,山梨酸的含量均不得超过0.5g/kg,检测苯甲酸一般采用气相色谱法和液相色谱法,气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强,且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大,使标准系列线性差,最低检出限较高。对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测,而液相色谱法样品处理相对简单。另外,高效液相色谱因采用高压输液泵和小顆粒的填料,与经典的液相色谱相比具有很高的柱和分离能力。为此 , 常规检测苯甲酸均采用HPLC方法。
然而乳制品中往往含有大量的油脂、蛋白质,对提取极为不利;如处理不干净也会污染色谱柱,影响检测工作。这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂,尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质,且不影响待测物组分的回收率。经过反复试验比较, 结果如下:
1、GB/T5009.29-2003使用5%硫酸铜溶液沉淀蛋白,对于蛋白质含量较低的食品尚可,对于乳制品等高脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
2、GB/T22400-2008中使用乙腈做沉淀剂,效果一般,处理后样品放置一段时间后又变浑浊,杂峰较多,对色谱柱有一定损害,需定期更换预柱,且接触有机试剂,对实验人员有一定危害。
3、用10%亚铁氰化钾溶液和20%醋酸锌溶液,效果较理想,操作简便。但亚铁氰化钾在紫外检测器下吸收峰强,个别仪器产生的色谱峰拖尾影响测定,实践中发现对个别色谱柱有一定影响,需定期更换预柱。
4、使用无水乙醇水浴沉淀,效果很好,无需接触有机试剂,对色谱柱无损伤,操作较简便。
其中方法4为本实验室在实践中摸索得出,具体方法为:称取10g样品与50ml离心管中,加入20ml无水乙醇,以水定容,75℃水浴15分钟,8000转以上/分钟离心5分钟,取上清液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中,样品处理液和标准溶液各进样5uL测定。
综上所述,亚铁氰化钾-乙酸锌沉淀法与无水乙醇处理法均在实际试验前处理中有较好效果,出峰无干扰,定量准确性好,处理方法简单快速,对色谱柱及检验人员影响小,可用于乳饮料及乳制品的日常检测。各实验室可根据自身仪器状况及实验条件自行选择适合的方法,以期在实际应用中优化试验结果。
参考文献
[1]GB/T 5009 29-2003 食品中山梨酸,苯甲酸的测定方法
[2]GB/T22400-2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法
[3]GB2760-2007 食品添加剂使用卫生标准
[4]卢丽明.含乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠测定的样品前处理方法探讨中图分类号:TS275. 4 文献标识码:B 文章编号: 1671 - 5039(2005) 06 - 0043 – 02
[5]祝伟霞.高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸 2005 年10 月第28 卷第5 期Chinese Frontier Health Quarantine Oct . 2005 , Vol 28 , No. 5
作者简介:杨青青(1982-),女,汉族,黑龙江齐齐哈尔人,毕业于哈尔滨商业大学食品科学与工程专业