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摘 要：建立反相高效液相色谱法测定古方生脉散中人参皂甙Rg1的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）为流动相，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。人参皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。人参皂甙Rg1平均回收率分别为99.6%。结论：本法简便、准确，可用于古方生脉散中人参皂甙Rg1的含量测定。
关键词：古方生脉散；含量；测定
生脉散是治疗气阴两虚证的常用方。生脉散由人参、麦门冬、五味子组成，方中人参补肺气，生津液，为君；麦门冬养阴清肺而生津，为臣；北五味子敛肺止渴、止汗，为佐。三药合用，共成补肺益气，养阴生津之功。《医方集解》记载：“人参甘温，大补肺气为君；麦冬止汗，润肺滋水，清心泻热为臣，五味酸温，敛肺生津，收耗散之气为佐。盖心主脉，肺朝百脉，补肺清心，则元气充而脉复，故曰生脉也。夏月炎暑，火旺克金，当以保肺为主，清晨服此，能益气而祛暑也。”人参皂甙是生脉散主要成分之一。人参皂甙Rg1有扩张脑血管、神经保护、促智、抗衰老、调节免疫、改善家兔心肌梗死后心功能、调节内皮细胞功能、改善新陈代谢等作用[1-6]。本文采用高效液相法对古方生脉散中的人参皂甙Rg1的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：优普杜伯特UP-DBT-III实验室洗瓶机（杜伯特（北京）科技有限公司）；VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃实业发展有限公司）；YLC1620A高效液相色谱仪（河南郑州南北仪器设备有限公司）；RU超纯水机（上海同田生物技术有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；DX-208恒温水浴槽（北京长流科学仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：人参皂甙Rg1
1.4 试剂：三乙胺（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、冰醋酸（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、甲醇（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、磷酸二氢铵（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、乙腈（北京市津同乐泰化工产品有限公司）。
1.5 试药：古方生脉散
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈——甲醇-水（8∶10∶82）为流动相，检测波长：203nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按人参皂甙Rg1峰计算应不得低于2500。
2.2 对照品溶液的制备
取在60℃减压干燥4小时的人参皂甙Rg1对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含20μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量，精密称定，加15毫升甲醇回流提取1.5小时，水浴蒸干，残渣加20毫升水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20毫升，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣加5毫升甲醇溶解，滤过，滤液置10ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。
2.4 精密度试验
精密称取人参皂甙Rg1对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.59%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量人参皂甙Rg1对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，人参皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的人参皂甙Rg1样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入人参皂甙Rg1对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.67%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定古方生脉散三批样品。
3 讨论
分别考察乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（50∶50），乙腈-甲醇-0.1mol/L醋酸溶液（25∶15∶60），乙腈-0.1%甲酸水（20∶80），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于古方生脉散中人参皂甙Rg1的含量测定。
参考文献
[1]周宜灿，陈晓春，朱元贵，陈丽敏，方芳.人参皂苷Rg1可能通过抗氧化作用来保护帕金森病鼠黑质神经元[J].中国临床药理学与治疗学，2003年03期.
[2]李勇.人參皂甙生物活性的研究进展[A]；第五届食品毒理学专业委员会学术会议及国际生命科学学会中国办事处生物活性物质学术研讨会论文集[C]，2004年.
[3]尚建伟，孔抗美，齐伟力，李振鹏，王新家，宋沛松.人参皂甙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[J].广东医学，2006年01期.
[4]陈新梅，朱家壁.人参皂苷Rg1脂质体对东莨菪碱诱导大鼠学习记忆障碍的改善及其作用机制[J].中国临床药理学与治疗学，2005年08期.
[5]曾育琦.人参皂甙Rb1和Rg1减轻β淀粉样蛋白25-35诱导的胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化的研究[D].福建医科大学，2004年.
[6]许小琴，金文杰，李金贵，秦爱建，陈鸿军.转化型人参皂苷抗MDV及诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探[J].扬州大学学报（农业与生命科学版），2004年03期.
关键词：古方生脉散；含量；测定
生脉散是治疗气阴两虚证的常用方。生脉散由人参、麦门冬、五味子组成，方中人参补肺气，生津液，为君；麦门冬养阴清肺而生津，为臣；北五味子敛肺止渴、止汗，为佐。三药合用，共成补肺益气，养阴生津之功。《医方集解》记载：“人参甘温，大补肺气为君；麦冬止汗，润肺滋水，清心泻热为臣，五味酸温，敛肺生津，收耗散之气为佐。盖心主脉，肺朝百脉，补肺清心，则元气充而脉复，故曰生脉也。夏月炎暑，火旺克金，当以保肺为主，清晨服此，能益气而祛暑也。”人参皂甙是生脉散主要成分之一。人参皂甙Rg1有扩张脑血管、神经保护、促智、抗衰老、调节免疫、改善家兔心肌梗死后心功能、调节内皮细胞功能、改善新陈代谢等作用[1-6]。本文采用高效液相法对古方生脉散中的人参皂甙Rg1的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：优普杜伯特UP-DBT-III实验室洗瓶机（杜伯特（北京）科技有限公司）；VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃实业发展有限公司）；YLC1620A高效液相色谱仪（河南郑州南北仪器设备有限公司）；RU超纯水机（上海同田生物技术有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；DX-208恒温水浴槽（北京长流科学仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：人参皂甙Rg1
1.4 试剂：三乙胺（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、冰醋酸（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、甲醇（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、磷酸二氢铵（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、乙腈（北京市津同乐泰化工产品有限公司）。
1.5 试药：古方生脉散
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈——甲醇-水（8∶10∶82）为流动相，检测波长：203nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按人参皂甙Rg1峰计算应不得低于2500。
2.2 对照品溶液的制备
取在60℃减压干燥4小时的人参皂甙Rg1对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含20μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量，精密称定，加15毫升甲醇回流提取1.5小时，水浴蒸干，残渣加20毫升水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20毫升，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣加5毫升甲醇溶解，滤过，滤液置10ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。
2.4 精密度试验
精密称取人参皂甙Rg1对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.59%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量人参皂甙Rg1对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，人参皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的人参皂甙Rg1样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入人参皂甙Rg1对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.67%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定古方生脉散三批样品。
3 讨论
分别考察乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（50∶50），乙腈-甲醇-0.1mol/L醋酸溶液（25∶15∶60），乙腈-0.1%甲酸水（20∶80），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于古方生脉散中人参皂甙Rg1的含量测定。
参考文献
[1]周宜灿，陈晓春，朱元贵，陈丽敏，方芳.人参皂苷Rg1可能通过抗氧化作用来保护帕金森病鼠黑质神经元[J].中国临床药理学与治疗学，2003年03期.
[2]李勇.人參皂甙生物活性的研究进展[A]；第五届食品毒理学专业委员会学术会议及国际生命科学学会中国办事处生物活性物质学术研讨会论文集[C]，2004年.
[3]尚建伟，孔抗美，齐伟力，李振鹏，王新家，宋沛松.人参皂甙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[J].广东医学，2006年01期.
[4]陈新梅，朱家壁.人参皂苷Rg1脂质体对东莨菪碱诱导大鼠学习记忆障碍的改善及其作用机制[J].中国临床药理学与治疗学，2005年08期.
[5]曾育琦.人参皂甙Rb1和Rg1减轻β淀粉样蛋白25-35诱导的胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化的研究[D].福建医科大学，2004年.
[6]许小琴，金文杰，李金贵，秦爱建，陈鸿军.转化型人参皂苷抗MDV及诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探[J].扬州大学学报（农业与生命科学版），2004年03期.