【摘 要】
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目的:探讨蛇床子素对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响及机制。方法:新生SD大鼠10只,脱颈处死后取出颅盖骨,剪成约1mm×1mm的碎片,采用胰酶预消化15min,继以0.1%Ⅰ型胶原酶3
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心,上海市中医药研究院骨伤科研究所,中国中医科学院望京医院
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目的:探讨蛇床子素对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响及机制。方法:新生SD大鼠10只,脱颈处死后取出颅盖骨,剪成约1mm×1mm的碎片,采用胰酶预消化15min,继以0.1%Ⅰ型胶原酶37℃消化2次,每次1h,所得细胞混匀后置于5%CO2培养箱中37℃恒温培养。细胞培养48h、28d后行ALP染色和矿化结节染色以进行成骨性鉴定。细胞随机分为5组,分别加入终浓度为100、50、25、12.5、0μmol/L的蛇床子素进行干预。24、48、72h后采用CCK-8法检测细胞增殖率,并通过Western Blot方法检测加药1周后PCNA、β-catenin蛋白表达量。结果:镜下观察细胞形态不规则,具有典型的成骨细胞形态;ALP染色及矿化结节染色均为阳性。CCK-8检测发现100μmol/L的蛇床子素干预24h后即可抑制成骨细胞生长,50μmol/L和25μmol/L的蛇床子素于加药后48h开始抑制成骨细胞生长,12.5μmol/L蛇床子素对成骨细胞的增殖无显著影响。Western Blot检测结果显示PCNA及β-catenin随蛇床子素浓度增加而表达下调。结论:100、50、25μmol/L各个浓度的蛇床子素可抑制成骨细胞增殖,12.5μmol/L蛇床子素对细胞的增殖特性无显著影响。蛇床子素抑制成骨细胞增殖的作用可能是通过干扰Wnt/β-catenin信号通路而实现的。
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