【摘 要】
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目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DRB1·0405小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对类风湿关节炎(RA)相关的HLA-DRB1*0405蛋白表达的影响.方法构建HLA-DRB1*0405蛋白表达质
【机 构】
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扬州大学兽医学院内科组,北京大学人民医院风湿免疫科
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目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DRB1·0405小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对类风湿关节炎(RA)相关的HLA-DRB1*0405蛋白表达的影响.方法构建HLA-DRB1*0405蛋白表达质粒siCHECKTM-2/HLA-DRB1*0405,同时针对HLA-DRB1*0405基因序列设计并构建6个小发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)表达质粒和1个针对无关序列的shRNA表达质粒.脂质体瞬时共转染两种质粒至人胚胎肾细胞293,以仅转染HLA-DRB1*0405蛋白表达质粒作为阴性对照,采用实时荧光定量PCR检测293细胞中HLA-DRB1*0405 mRNA的表达,通过测定荧光素酶强度分析293细胞中HLA-DRB1*0405 蛋白水平.结果所设计的6个HLA- DRB1*0405 siRNA可不同程度的抑制HLA-DRB1*0405在293细胞中的表达,对mRNA水平,其抑制率最高可达89.25%,而在蛋白水平,其抑制率达46.70%.结论质粒介导的HLA-DRB1*0405 siRNA可明显抑制HLA-DRB1*0405在人胚胎肾细胞株293中的表达,为利用RNA干扰(RNA interference, RNAi)抑制RA中HLA-DRB1介导的异常免疫反应提供了试验依据.
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