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摘?要 本文以罗非鱼鱼鳞明胶为原料，利用六种蛋白酶对明胶进行酶解，测定其不同酶解产物的抗氧化性、血管紧张素I转换酶（ACE）抑制活性、α-葡萄糖苷酶（AG）抑制活性等生物活性。六种蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力为76.7%和76%，高于VC的65.6%；除中性蛋白酶对DPPH自由基没有清除力以外，其余5种蛋白酶均对DPPH自由基有清除力，但是低于VC；胃蛋白酶水解液对α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用最强，为67.1%，而中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶水解液对α-葡萄糖苷酶没有抑制作用。6种蛋白酶的水解产物均有的ACE抑制活性。
关键词 鱼鳞；明胶；酶解产物；生物活性
中图分类号 TS20 文献标识码 A 文章编号 1673-9671-(2012)062-0228-01
鱼鳞是有鳞鱼加工的主要副产品之一，占鱼体重量的1%-5%。目前对鱼鳞的开发利用主要有以下几个方面：提取鱼鳞胶，作为食品、化妆品等原材料，具有抗氧化和降低血压、降低血液总胆固醇、抗衰老等功效；制备鱼鳞水解液，除水解出大量的氨基酸外还会产生具有特定功能的肽；提取鱼银，作为一种昂贵的生物试剂，用于珍珠装饰业和油漆制造业；低值淡水鱼的鱼鳞可用来开发鱼鳞凉粉、鱼鳞冻膏、干制鱼鳞等食品，制作成各种工艺品；提取卵磷脂；提取鸟嘌呤，用于治疗白血病。
1 材料与仪器
1.1 实验材料
冷冻罗非鱼鱼鳞；木瓜蛋白酶、胰蛋白酶；胃蛋白酶；酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。
1.2 实验仪器
真空泵、旋转蒸发器；紫外可见分光光度计；冷冻干燥机；氨基酸自动分析仪；精密增力电动搅拌器
2 实验方法
2.1 鱼鳞明胶提取
鱼鳞50.00 g按照设定的提取时间、温度、液料比提取，经铁筛过滤，滤液用105℃干燥，得到明胶。
2.2 明胶酶解产物活性研究
2.2.1 明胶的酶解
不同蛋白酶对同一底物的水解效果不同，本实验选用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶分别对明胶进行水解。
2.2.2 抗氧化活性的测定
1）羟自由基清除作用。试管中依此加入硫酸亚铁1mL，水杨酸-乙醇1 mL，样品1 mL，H2O2 1 mL，将混合液在37℃水浴锅中反应30 min，取出后用分光光度计在510 nm波长下测定吸光值。
计算公式为：清除率I（%）=[1-（As-Ao）/Ac ]×100
2）DPPH自由基清除力。试管中加入4 mL样品，1 mLDPPH-乙醇溶液，充分震荡后暗室反应30min，用分光光度计在517 nm波长下测定吸光值。（不加样品加蒸馏水为空白对照，以100 μg/ml的VC作阳性对照）
计算公式为：DPPH自由基清除率I（%）=（Ac-As）/Ac×100
2.2.3 血管紧张素I转换酶抑制活性测定
取5ul样品加入15 ul的ACE酶（37℃ 5 min）后，加入25 ulHHL（三肽马尿酰-组氨酸-亮氨酸）（37℃ 25 min），再加入0.1%三氟乙酸（TFA）10 ul于16500×g的速度4℃离心20 min后，取上清液在228 nm处紫外光检测条件下检测马尿酸的峰面积。（以缓冲液替代样品作为空白对照）
计算公式为：抑制率I（%）=（Ac- As）/Ac×100%
2.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
抑制剂活力测定：根据Tremblay等的方法测定AG的活性，即以pNPG为底物，0.5 mol/L碳酸钠溶液为终止液。在37℃，pH6.8的条件下反应，用酶标仪在405 nm波长处比色测定。
计算公式为：抑制率I（%）=1-[（As- AB）/Ac×100%]
3 结果与讨论
3.1 抗氧化活性的测定
3.1.1 羟自由基清除作用
六种蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力较强分别为76.7%和76.0%，甚至高于VC的65.6%；其次为中性蛋白酶水解液、酸性蛋白酶水解液和胃蛋白酶水解液；而木瓜蛋白酶水解液清除率仅为6.8%。
3.1.2 DPPH自由基清除力
六种蛋白酶水解液中，碱性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最强为42.2%，低于阳性对照VC的47.7%，其次为胃蛋白酶水解液30.8%和酸性蛋白酶水解液25.6%，再次为胰蛋白酶水解液16.3%和木瓜蛋白酶水解液10.9。中性蛋白酶对DPPH自由基没有清除能力。
3.2 血管紧张素I转换酶抑制活性测定
六种蛋白酶水解液中，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高为71.7%，其次为木瓜蛋白酶水解液68.9%和碱性蛋白酶水解液68.7%，再次为胰蛋白酶水解液63.9%和中性蛋白酶水解液61.5%，ACE抑制率最低的是胃蛋白酶水解液仅为0.78%。
3.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
六种蛋白酶水解液对AG活性有截然不同的作用。酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对AG有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制率为67.10%，对AG的抑制作用最强。而中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶明胶水解液对AG没有抑制作用。
4 结论
六种不同的酶（酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶）水解鱼鳞明胶，对其生物活性进行比较。其中胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力较强分别为76.7%和76.0%，高于VC的65.6%；碱性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最强42.4%，但不及VC；六种蛋白酶水解液中酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对AG活性有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制作用最强为67.10%；六种酶水解液均有ACE抑制作用，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高71.7%。
参考文献
[1]钟朝辉,李春美,梁晋鄂等.鱼鳞胶原蛋白提取工艺的优化[J].食品科学,2006,27(07):162-166.
[2]刘庆慧,王彩理,刘丛力.鱼鳞胶原蛋白研究[J].海洋水产研究,2000.
21(3):57-61.
[3]张俊杰,曾庆孝.鱼鳞的开发利用前景[J].中国水产,2004,5:74-75.
[4]吴继魁,张俊玲.草鱼鱼鳞中提取卵磷脂的最佳工艺[J].上海水产大学学报2005,14(4):428-431.
[5]王理彩,刘从力,任红.鱼鳞的加工及利用[J].北京水产,2005,1:44-45.
[6]宁正祥.食品成分分析手册[M].北京:中国轻工业出版社,1998:119-143.
[7]Chapdelaine P,Tremblay RR,Dube JY. p-Nitrophenol-α-D-glucopyranoside as substrate for measurement of maltase activity in human semen[J].Clin Chem, 1978, 24(2):208-211.
作者简介
康乐（1983—），女，辽宁辽阳人，助教，硕士研究生，研究方向：食品科学。
关键词 鱼鳞；明胶；酶解产物；生物活性
中图分类号 TS20 文献标识码 A 文章编号 1673-9671-(2012)062-0228-01
鱼鳞是有鳞鱼加工的主要副产品之一，占鱼体重量的1%-5%。目前对鱼鳞的开发利用主要有以下几个方面：提取鱼鳞胶，作为食品、化妆品等原材料，具有抗氧化和降低血压、降低血液总胆固醇、抗衰老等功效；制备鱼鳞水解液，除水解出大量的氨基酸外还会产生具有特定功能的肽；提取鱼银，作为一种昂贵的生物试剂，用于珍珠装饰业和油漆制造业；低值淡水鱼的鱼鳞可用来开发鱼鳞凉粉、鱼鳞冻膏、干制鱼鳞等食品，制作成各种工艺品；提取卵磷脂；提取鸟嘌呤，用于治疗白血病。
1 材料与仪器
1.1 实验材料
冷冻罗非鱼鱼鳞；木瓜蛋白酶、胰蛋白酶；胃蛋白酶；酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。
1.2 实验仪器
真空泵、旋转蒸发器；紫外可见分光光度计；冷冻干燥机；氨基酸自动分析仪；精密增力电动搅拌器
2 实验方法
2.1 鱼鳞明胶提取
鱼鳞50.00 g按照设定的提取时间、温度、液料比提取，经铁筛过滤，滤液用105℃干燥，得到明胶。
2.2 明胶酶解产物活性研究
2.2.1 明胶的酶解
不同蛋白酶对同一底物的水解效果不同，本实验选用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶分别对明胶进行水解。
2.2.2 抗氧化活性的测定
1）羟自由基清除作用。试管中依此加入硫酸亚铁1mL，水杨酸-乙醇1 mL，样品1 mL，H2O2 1 mL，将混合液在37℃水浴锅中反应30 min，取出后用分光光度计在510 nm波长下测定吸光值。
计算公式为：清除率I（%）=[1-（As-Ao）/Ac ]×100
2）DPPH自由基清除力。试管中加入4 mL样品，1 mLDPPH-乙醇溶液，充分震荡后暗室反应30min，用分光光度计在517 nm波长下测定吸光值。（不加样品加蒸馏水为空白对照，以100 μg/ml的VC作阳性对照）
计算公式为：DPPH自由基清除率I（%）=（Ac-As）/Ac×100
2.2.3 血管紧张素I转换酶抑制活性测定
取5ul样品加入15 ul的ACE酶（37℃ 5 min）后，加入25 ulHHL（三肽马尿酰-组氨酸-亮氨酸）（37℃ 25 min），再加入0.1%三氟乙酸（TFA）10 ul于16500×g的速度4℃离心20 min后，取上清液在228 nm处紫外光检测条件下检测马尿酸的峰面积。（以缓冲液替代样品作为空白对照）
计算公式为：抑制率I（%）=（Ac- As）/Ac×100%
2.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
抑制剂活力测定：根据Tremblay等的方法测定AG的活性，即以pNPG为底物，0.5 mol/L碳酸钠溶液为终止液。在37℃，pH6.8的条件下反应，用酶标仪在405 nm波长处比色测定。
计算公式为：抑制率I（%）=1-[（As- AB）/Ac×100%]
3 结果与讨论
3.1 抗氧化活性的测定
3.1.1 羟自由基清除作用
六种蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力较强分别为76.7%和76.0%，甚至高于VC的65.6%；其次为中性蛋白酶水解液、酸性蛋白酶水解液和胃蛋白酶水解液；而木瓜蛋白酶水解液清除率仅为6.8%。
3.1.2 DPPH自由基清除力
六种蛋白酶水解液中，碱性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最强为42.2%，低于阳性对照VC的47.7%，其次为胃蛋白酶水解液30.8%和酸性蛋白酶水解液25.6%，再次为胰蛋白酶水解液16.3%和木瓜蛋白酶水解液10.9。中性蛋白酶对DPPH自由基没有清除能力。
3.2 血管紧张素I转换酶抑制活性测定
六种蛋白酶水解液中，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高为71.7%，其次为木瓜蛋白酶水解液68.9%和碱性蛋白酶水解液68.7%，再次为胰蛋白酶水解液63.9%和中性蛋白酶水解液61.5%，ACE抑制率最低的是胃蛋白酶水解液仅为0.78%。
3.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
六种蛋白酶水解液对AG活性有截然不同的作用。酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对AG有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制率为67.10%，对AG的抑制作用最强。而中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶明胶水解液对AG没有抑制作用。
4 结论
六种不同的酶（酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶）水解鱼鳞明胶，对其生物活性进行比较。其中胰蛋白酶水解液和碱性蛋白酶水解液的羟自由基清除力较强分别为76.7%和76.0%，高于VC的65.6%；碱性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最强42.4%，但不及VC；六种蛋白酶水解液中酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对AG活性有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制作用最强为67.10%；六种酶水解液均有ACE抑制作用，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高71.7%。
参考文献
[1]钟朝辉,李春美,梁晋鄂等.鱼鳞胶原蛋白提取工艺的优化[J].食品科学,2006,27(07):162-166.
[2]刘庆慧,王彩理,刘丛力.鱼鳞胶原蛋白研究[J].海洋水产研究,2000.
21(3):57-61.
[3]张俊杰,曾庆孝.鱼鳞的开发利用前景[J].中国水产,2004,5:74-75.
[4]吴继魁,张俊玲.草鱼鱼鳞中提取卵磷脂的最佳工艺[J].上海水产大学学报2005,14(4):428-431.
[5]王理彩,刘从力,任红.鱼鳞的加工及利用[J].北京水产,2005,1:44-45.
[6]宁正祥.食品成分分析手册[M].北京:中国轻工业出版社,1998:119-143.
[7]Chapdelaine P,Tremblay RR,Dube JY. p-Nitrophenol-α-D-glucopyranoside as substrate for measurement of maltase activity in human semen[J].Clin Chem, 1978, 24(2):208-211.
作者简介
康乐（1983—），女，辽宁辽阳人，助教，硕士研究生，研究方向：食品科学。