【摘 要】
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目的 了解化学合成小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对原代培养神经元Nogo受体(Nogo receptor,NgR)mRNA作用的时效关系和毒性作用.方法 化学合成一段针对大鼠NgR基因
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院神经外科,上海市消化疾病研究所
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目的 了解化学合成小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对原代培养神经元Nogo受体(Nogo receptor,NgR)mRNA作用的时效关系和毒性作用.方法 化学合成一段针对大鼠NgR基因编码区的siRNA,用阳离子脂质体转染大鼠皮层神经元.分别于转染前、转染后24h、48h、72h、96h行RT-PCR检测NgR mRNA水平.碘化丙啶(PI)染色检测转染后各时间点神经细胞的存活情况.结果 转染siRNA后24h和48h NgR mRNA水平明显下降,到72h明显回升,转染后96h NgRmRNA水平与转染前差异无统计学意义.PI染色显示转染后24h和48h,用脂质体转染的细胞(包括转染siRNA、无关序列Oligo和单纯脂质体组)其PI阳性率与非转染对照组无统计学意义,而转染后72h和96h两者差异有统计学意义,但在各时间点,脂质体转染的各组间PI阳性率差异无统计学意义.结论 化学合成siRNA能有效促进原代皮层神经元的NgR mRNA降解,并于短期内维持于低水平.该段siRNA转染的毒性作用主要来自于转染试剂,与序列本身无明确关系.
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