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【摘要】:近年现代技术在中药检验中的应用取得了一些进展。本文从微观形态技术、色谱与质谱联用技术、超临界流体萃取与色谱法联用技术、高效毛细管电泳技术等新技术在中药检验中的应用进行简单介绍。
【关键词】:中药 检验 进展
近年现代技术在中药检验中的应用取得了一些进展。如微观形态技术、色谱与质谱联用技术、超临界流体萃取与色谱法联用技术、高效毛细管电泳技术等新技术在中药检验中已有较多的应用。这些新技术能提高分析的准确度、灵敏度和选择性,具有广阔的应用前景。
1 微观形态技术
自1932年扫描电镜诞生以来,发展起了一门独立的学科一一微形态学,从而将生药学的发展划分为3个水平:靠肉眼观察的形状描绘水平、借助光学显微镜观察的显微鉴别水平和应用电子显微镜观察分析微观形态或结构的亚显微水平。现已证明植物的一些微细形态结构特征,以其高度的品种专属性和稳定的遗传性,而成为植物药分类鉴定的依据。
1.1 扫描电镜(SEM)技术
扫描电镜已被广泛地应用于观察分析微观形态或结构的亚显微水平,它是南显微镜圆筒、电源线路、视频控制装置和真空系统组成,其最大特点之一就是能获得具实感的三维物体图像。通常在观察前,将大小、厚度适合样品室要求的干燥中药样品粘着于样品台上,置真空喷镀仪内镀一层导电膜(金、钯、铝、碳等)后,即可观察。目前电镜主要用于植物中药的种子、花粉、叶表面构造的研究和蛇类中药等的研究,并已取得了很多成果。扫描电镜的优点是无须经过繁琐的预处理,尤其是对处于干燥状态的中药材,就能直接进行观察并获得样品表面或断面的亚显微特征。例如张朝晖等首次对海马皮膜进行了扫描电镜观察与图像定量分析,结果表明大海马、三斑海马和小海马皮膜上均有鳞片状突起物,其表面有同心圆状纹理,但鳞片状突起物在形状、大小、排列方式上有一定的差异;从对45张扫描电镜照片以长径、短径、面积等为参数进行的图像定量分析发现,同种海马不同部位的上述参数均无显著性差异,而不同种之间除形状因子外均有显著性差异,为显微鉴定提供了参考依据。
1.2 图像分析技术
用CCD摄像机直接对样本进行采样,将采样图像输入APOLLODN3500计算机图像分析系统,待图像完全格式转化后,用特定的图像分析程序进行分析测定,将分别得到系列参数(如最大直径、最大横截面积、周长、体积等),然后进行数学处理。图像分析与常规测量相比具有很多优点,用计算机代替人工进行繁琐的形态学测量,可以得到三维立体参数。秦路平等运用该技术对20种细小种子类生药进行了分析测定,除最大直径外,还得到了种子的周长、截面积和体积等,这是常规测量难以达到的;还可以测得种子的不规则参数f或形状因子),从而可以采用定量表达的方法,弥补有关种子形状的人为描述不足,因而取得了满意的结果。他们还曾报道了对15种叶类牛药气孔的研究、20种细小果实类生药和22种花类生药花粉分析等计算机图像分析技术在生药学中的应用,为生药的现代鉴别探索了一条新路子。
2 光谱法技术
光谱法技术(uv、IR、MS、NMR)用于品种鉴定研究日益受到重视。过去只有uv和IR作为药材鉴定的辅助手段,有的还采用导数光谱法来进一步提高分辨率。近期秦海林等开展了核磁共振氢谱鉴别植物中药的研究。通过中药的特征总提取物和特征单体成分的HNMR指紋图谱分析,结果显示,所研究的各种中药的HNMR指纹图均有高度的特征性和重现行,同一品种不同产:地的样品的HNMR指纹图也有很好的一致性;人参、天麻、唐古特大黄、掌叶大黄等多种植物中药的特征总提取物的HNMR指纹图主要显示了其活性成分的特征共振峰;蓼属、大黄属植物的HNMR指纹图既存在相同的部分,又有本质的区别。说明核磁共振氢谱能够作为中药种间、属间的鉴别参照,但该方法还有待进一步的探索。
3 X射线衍射法技术
由于粉末衍射图谱与晶体具有一一对应的专属性,对于含多组分的样品(如中药材或中成药),其粉末衍射图谱相当于样品内各组分粉末衍射图的叠加,这是应用X射线衍射对中药分析鉴定的理论基础,由于各种中药的组成成分不相同,每种中药都有反映其各组分特征的X射线衍射图谱,南此可实现对中药进行鉴别的目的。动物结石药材具有良好的结晶度,图谱中衍射峰尖锐,易于识别。如运用该法对国产天然牛黄以及人工牛黄、马宝等药材进行分析研究,结果显示各种结石的X射线图谱有明显的特征性;该法同样也可用于植物类药,如对10种淫羊藿药材进行了鉴别。X射线衍射法是既能反映中药材整体特征又能提供中药质量评价标准的有效分析方法,具有实验操作快速、简单,图谱指纹专属性强、信息量大,所需样品量小且被测样品无损伤等诸多优点。
4 差热分析技术
差热分析法技术对中药材进行热谱扫描,以热焓值的大小作为定性指标鉴别。近年有对木属药材、琥珀和松香等的鉴别报道。该法具有准确度高、精密度好等优点。
5 现代技术在中药检验中应用面临的挑战
由于现行国家药品标准中规定有量化分析的中药材品种数量少,并且量化分析中现代分析方法占大多数,地(市)以下基层单位难以开展。中药材确定有定量方法的品种少,与现代分析方法所需的检测仪器、化学对照品难以普及的矛盾更加突出。以2000版中国药典一部中药材品种为例,气相色谱法、高效液相色谱法、薄层扫描法等现代分析法占含量测定总数的48.6%(不含浸出物测定)。同时,定量用的化学对照品和药材对照品奇缺,供应严重不足,在药典未收载其它含量测定方法可供选择的情况下,基层单位只好望而却步,质控难以奏效。
【关键词】:中药 检验 进展
近年现代技术在中药检验中的应用取得了一些进展。如微观形态技术、色谱与质谱联用技术、超临界流体萃取与色谱法联用技术、高效毛细管电泳技术等新技术在中药检验中已有较多的应用。这些新技术能提高分析的准确度、灵敏度和选择性,具有广阔的应用前景。
1 微观形态技术
自1932年扫描电镜诞生以来,发展起了一门独立的学科一一微形态学,从而将生药学的发展划分为3个水平:靠肉眼观察的形状描绘水平、借助光学显微镜观察的显微鉴别水平和应用电子显微镜观察分析微观形态或结构的亚显微水平。现已证明植物的一些微细形态结构特征,以其高度的品种专属性和稳定的遗传性,而成为植物药分类鉴定的依据。
1.1 扫描电镜(SEM)技术
扫描电镜已被广泛地应用于观察分析微观形态或结构的亚显微水平,它是南显微镜圆筒、电源线路、视频控制装置和真空系统组成,其最大特点之一就是能获得具实感的三维物体图像。通常在观察前,将大小、厚度适合样品室要求的干燥中药样品粘着于样品台上,置真空喷镀仪内镀一层导电膜(金、钯、铝、碳等)后,即可观察。目前电镜主要用于植物中药的种子、花粉、叶表面构造的研究和蛇类中药等的研究,并已取得了很多成果。扫描电镜的优点是无须经过繁琐的预处理,尤其是对处于干燥状态的中药材,就能直接进行观察并获得样品表面或断面的亚显微特征。例如张朝晖等首次对海马皮膜进行了扫描电镜观察与图像定量分析,结果表明大海马、三斑海马和小海马皮膜上均有鳞片状突起物,其表面有同心圆状纹理,但鳞片状突起物在形状、大小、排列方式上有一定的差异;从对45张扫描电镜照片以长径、短径、面积等为参数进行的图像定量分析发现,同种海马不同部位的上述参数均无显著性差异,而不同种之间除形状因子外均有显著性差异,为显微鉴定提供了参考依据。
1.2 图像分析技术
用CCD摄像机直接对样本进行采样,将采样图像输入APOLLODN3500计算机图像分析系统,待图像完全格式转化后,用特定的图像分析程序进行分析测定,将分别得到系列参数(如最大直径、最大横截面积、周长、体积等),然后进行数学处理。图像分析与常规测量相比具有很多优点,用计算机代替人工进行繁琐的形态学测量,可以得到三维立体参数。秦路平等运用该技术对20种细小种子类生药进行了分析测定,除最大直径外,还得到了种子的周长、截面积和体积等,这是常规测量难以达到的;还可以测得种子的不规则参数f或形状因子),从而可以采用定量表达的方法,弥补有关种子形状的人为描述不足,因而取得了满意的结果。他们还曾报道了对15种叶类牛药气孔的研究、20种细小果实类生药和22种花类生药花粉分析等计算机图像分析技术在生药学中的应用,为生药的现代鉴别探索了一条新路子。
2 光谱法技术
光谱法技术(uv、IR、MS、NMR)用于品种鉴定研究日益受到重视。过去只有uv和IR作为药材鉴定的辅助手段,有的还采用导数光谱法来进一步提高分辨率。近期秦海林等开展了核磁共振氢谱鉴别植物中药的研究。通过中药的特征总提取物和特征单体成分的HNMR指紋图谱分析,结果显示,所研究的各种中药的HNMR指纹图均有高度的特征性和重现行,同一品种不同产:地的样品的HNMR指纹图也有很好的一致性;人参、天麻、唐古特大黄、掌叶大黄等多种植物中药的特征总提取物的HNMR指纹图主要显示了其活性成分的特征共振峰;蓼属、大黄属植物的HNMR指纹图既存在相同的部分,又有本质的区别。说明核磁共振氢谱能够作为中药种间、属间的鉴别参照,但该方法还有待进一步的探索。
3 X射线衍射法技术
由于粉末衍射图谱与晶体具有一一对应的专属性,对于含多组分的样品(如中药材或中成药),其粉末衍射图谱相当于样品内各组分粉末衍射图的叠加,这是应用X射线衍射对中药分析鉴定的理论基础,由于各种中药的组成成分不相同,每种中药都有反映其各组分特征的X射线衍射图谱,南此可实现对中药进行鉴别的目的。动物结石药材具有良好的结晶度,图谱中衍射峰尖锐,易于识别。如运用该法对国产天然牛黄以及人工牛黄、马宝等药材进行分析研究,结果显示各种结石的X射线图谱有明显的特征性;该法同样也可用于植物类药,如对10种淫羊藿药材进行了鉴别。X射线衍射法是既能反映中药材整体特征又能提供中药质量评价标准的有效分析方法,具有实验操作快速、简单,图谱指纹专属性强、信息量大,所需样品量小且被测样品无损伤等诸多优点。
4 差热分析技术
差热分析法技术对中药材进行热谱扫描,以热焓值的大小作为定性指标鉴别。近年有对木属药材、琥珀和松香等的鉴别报道。该法具有准确度高、精密度好等优点。
5 现代技术在中药检验中应用面临的挑战
由于现行国家药品标准中规定有量化分析的中药材品种数量少,并且量化分析中现代分析方法占大多数,地(市)以下基层单位难以开展。中药材确定有定量方法的品种少,与现代分析方法所需的检测仪器、化学对照品难以普及的矛盾更加突出。以2000版中国药典一部中药材品种为例,气相色谱法、高效液相色谱法、薄层扫描法等现代分析法占含量测定总数的48.6%(不含浸出物测定)。同时,定量用的化学对照品和药材对照品奇缺,供应严重不足,在药典未收载其它含量测定方法可供选择的情况下,基层单位只好望而却步,质控难以奏效。