【摘 要】
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目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H2O2)诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制.方法:体外培养H9c2细胞,H2O2诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)检测细胞存活率,高效液相色谱法(HPLC)进行肽段分级,超高效液相色谱-质谱联用技术检测H9c2细胞的蛋白表达,使用MaxQuant(v1.5.2.8)进行数据检索,高分辨质谱定量分析筛选差异表达蛋白,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库
【机 构】
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贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心,省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵阳550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室,贵阳550004;贵州医科大学药学院,贵阳5500
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目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H2O2)诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制.方法:体外培养H9c2细胞,H2O2诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)检测细胞存活率,高效液相色谱法(HPLC)进行肽段分级,超高效液相色谱-质谱联用技术检测H9c2细胞的蛋白表达,使用MaxQuant(v1.5.2.8)进行数据检索,高分辨质谱定量分析筛选差异表达蛋白,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达蛋白进行生物信息学分析,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内脂质结合蛋白2(Plin2)和原肌球蛋白1(Tpm1)的蛋白表达水平进行验证.结果:通过谱图解析鉴定有48 608个特异性肽段,5 903个可定量蛋白.与模型组比较,SGI组有82个差异表达的蛋白,其中有22个蛋白上调,60个蛋白下调.GO分析结果显示,差异表达蛋白主要参与程序性细胞死亡调节、细胞增殖调控、心血管系统发育和细胞迁移等生物进程.KEGG分析结果表明,这些蛋白与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),黏着斑和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt),Ras相关蛋白l(Rap1)等通路有关.Western blot结果显示,与模型组比较,SGI能显著增加Plin2蛋白表达水平,显著降低Tpml蛋白表达水平(P＜0.01),与蛋白质组学结果一致.结论:提示SGI可能通过调控PPAR,黏着斑,PI3K/Akt和Rap1等通路抑制细胞凋亡,从而拮抗H2O2诱导细胞氧化损伤,但需要后续实验进一步验证研究.
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