miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、ROS水平及PI3K/AKT信号通路的影响研究

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目的:探索miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、活性氧簇 (ROS) 水平及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶 (PI3K/AKT) 信号通路的影响.方法:将H9C2心肌细胞分为对照组、NC组、H_2O_2组、miR-182mimics组和miR-182inhibitor组, 各组细胞均培养24h, 逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR) 检测miR-182的mRNA表达;CCK8法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS含量;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67和细胞增殖核抗原 (PCNA), 凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3) 和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9 (Caspase-9) 及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3K) 、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶 (p-AKT) 的蛋白表达.结果:与对照组比较, H_2O_2组细胞miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著降低, 细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9的表达均显著升高 (均P<0.05);与H_2O_2组比较, miR-182mimics组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著升高, 细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著降低 (均P<0.05), miR-182inhibitor组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖显著降低, 细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著升高 (均P<0.05) .结论:H_2O_2刺激可降低H9C2心肌细胞miR-182基因表达, 过表达miR-182可促进细胞增殖, 降低细胞凋亡, 激活PI3K/AKT信号通路, 其中对细胞增殖凋亡的影响方式是降低ROS含量, 上调ki67和PCNA表达, 下调Caspase-3和Caspase-9表达;抑制miR-182表达的结果则相反.“,”Objective:To explore the effect of miR-182 gene on proliferation and apoptosis, the level of ROS and PI3 K/AKT signaling pathway in myocardial cells.Method:H9 C2 cells were divided into control group, NC group, H_2O_2group, miR-182 mimics group and miR-182 inhibitor group, cells were cultured for 24 h, RT-PCR was used to detect the mRNA expression of miR-182;cell proliferation was detected by CCK8 assay;cell apoptosis and ROS content were detected by flow cytometry;Western bloting were used to detect Ki67, PCNA, Caspase-3, Caspase-9, PI3 K, and p-AKT protein expression.Result:Compared with the control group, Ki67, miR-182, PCNA, PI3 K, pAKT expression and cell proliferation in H_2O_2group were significantly decreased, cell apoptosis rate, the content of ROS and Caspase-3 and Caspase-9 expression were significantly increased (P<0.05);compared with H_2O_2group, Ki67, miR-182, PCNA, PI3 K, p-AKT expression and cell proliferation in miR-182 mimics group were significantly increased, cell apoptosis rate, the content of ROS and Caspase-3 and Caspase-9 expression were significantly decreased (P<0.05), miR-182, Ki67, PCNA, PI3 K, p-AKT expression and cell proliferation in miR-182 inhibitor group were significantly decreased, cell apoptosis rate, the content of ROS and Caspase-3 and Caspase-9 expression were significantly increased (P<0.05).Conclusion:H_2O_2stimulation can reduce miR-182 gene expression in H9 C2 Cardiomyocytes, overexpression of miR-182 can promote cell proliferation, reduce cell apoptosis, activated the PI3 K/AKT signaling pathway, the effect of cell proliferation and apoptosis was to reduce the content of ROS, up regulate the expression of Ki67 and PCNA, and down regulate the expression of Caspase-3 and Caspase-9.Inhibition of miR-182 expression is the opposite.
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