【摘 要】
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目的 构建人源性胶质瘤噬菌体抗体库 .方法 经逆转录、套式PCR从脑胶质瘤患者血淋巴细胞中扩增出抗体轻链Vκ 和重链VH 基因 .先构建Vκ 基因库 ,并使连接Vκ 和VH基因的Li
【机 构】
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目的 构建人源性胶质瘤噬菌体抗体库 .方法 经逆转录、套式PCR从脑胶质瘤患者血淋巴细胞中扩增出抗体轻链Vκ 和重链VH 基因 .先构建Vκ 基因库 ,并使连接Vκ 和VH基因的Linker与Vκ 基因连接 ,再将VH 基因克隆入Vκ 基因库 ,即构建成约为 3.5× 10 6 的单链抗体 (ScFv)基因库 .以Loxp5 11序列替代Linker序列 ,并将ScFv克隆入pDNA5内进行重组、鉴定 ,得到新的ScFv噬菌体抗体库 .结果 表明原初级噬菌体抗体库经Cre Loxp5 11系统重组后库容量达到 8.5× 10 8,部分测序证实抗体基因与人源性抗体基因数据库同源 .结论 利用体内重组系统明显提高了所建的抗体库容量 ,为进一步筛选特异性人源性抗脑胶质瘤ScFv奠定了基础
Objective To construct a human glioblastoma phage antibody library.Methods Vk and VH genes were amplified from blood lymphocytes of patients with glioma by reverse transcription and nested PCR. Linker connecting VK and VH gene to VK gene and then cloning VH gene into VK gene pool to construct a scFv gene library about 3.5 × 10 6 Linker sequence was replaced by Loxp5 11 sequence, The new ScFv phage antibody library was obtained by cloning ScFv into pDNA5.The result showed that the original phage antibody library reached a capacity of 8.5 × 10 8 by Cre Loxp 5 11 system recombination, Homologous antibody database.Conclusion The in vivo recombination system can significantly improve the capacity of the constructed antibody library and lay a foundation for further screening of specific human anti-glioma ScFv
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