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【摘 要】 香菇多糖（Lentinan，LNT）作为一种可从香菇中提取天然物质被学者们广泛研究，其生物活性很多，有良好的保健功能和免疫增强作用，在食用和药用方面均得到极大认可，LNT分离和纯化方法被认为是研究关键，本文综述了分离纯化方法并展望了香菇多糖的研究方向。
【关键词】 香菇多糖 生物活性 分离 纯化
前言
食用真菌可作为世界名贵的药材，香菇（Lentinusedodes）有菌中皇后的美称，从中分离纯化出来对人体有益的大分子物质——香菇多糖，它是由几十到几万个单糖组成，β-D（1→3）葡聚糖残基构成主链，侧链则是由（1→6）葡聚糖残基构成[1]。LNT为灰白色粉末，对光和热稳定，不溶于乙醇，丙酮，乙醚等有机溶剂，可溶于弱碱，极易溶于热水，同时也具有一定的吸湿性，在分离提取后需要密封保存。LNT作为一种特殊免疫佐剂可以识别胸腺依赖的T细胞和巨噬细胞促使淋巴细胞活化因子的产生，导致胸腺向外周血释放淋巴细胞的数量增多[2]。
受遗传、自然环境污染及饮酒、吸烟等因素的影响，全球肿瘤类疾病的发生率直线上升。香菇多糖注射剂作用迅速，可靠性强，吸收效果好，比口服药物疗效显著，在抗肿瘤方面应用广泛[3]。然而香菇多糖注射剂对提取的LNT纯度要求高，不同的分离纯化方法得到的香菇多糖纯度有很大差别，直接影响以LNT为研究对象的试验结果。因此，选择既经济又高效的提取方法对充分实现LNT的生物学活性有重要意义。
1 香菇多糖的分离
LNT分离方法常用的有活性酶去除其他结构的复合酶解法，用酸或碱萃取的浸提法，利用微波能破裂细胞释放所需物质的微波提取法等。酸或碱易破坏多糖的结构，此方法难以控制酸碱度范围，故不常选用，最常用的是水提醇沉法，将香菇碎裂放入热水中浸提后过滤，滤渣反复提取多次，弃滤渣留滤液，加入3倍体积的95%乙醇离心、过滤，将滤液浓缩、烘干即得粗多糖[4]。纤维素酶和果胶酶作为酶法中的复合酶常被用来酶解细胞表面结构充分释放多糖，酶法通常得率较高。微波法是新型提取多糖的方法，提取工艺简单，节能省时，但是最佳微波时间没有得到精确数据，还有待进一步研究[5]。
张军霞等人做出试验研究，在复合酶解的基础上，结合热水浸提，加入酸处理步骤，此复合方法效果更显著，增加了多糖及还原性寡糖的浸提率，复合酶解时溶液的酸碱度保持在5.0左右，在90℃的热水中酶解80分钟，浸提时间在100分钟以内为最佳提取条件[6]。实际生产中，根据实验的要求，选择合适的方法，既能提高提取率又能充分利用资源。
2 香菇多糖纯化
纯化香菇多糖的方法常选使用滤膜过滤的超滤法、加沉淀剂的沉淀法、根据两相系统理化差别的层析法等。超滤法中膜分离技术可除去大部分小分子杂质，且分级效果好，有利于后期精制。超滤技术所用的有机或无机超滤膜是关键，多糖经有机超滤膜纯化后在纯度和色泽上比较好，但要严格限制有机膜自身因素防止造成大分子多糖污染，提高纯化效率选用无机超滤膜则更好[7]。溶剂沉淀法对实验室的要求不高，方便操作但易引入其他物质。醇类和酮类是分级沉淀法中常选用的沉淀剂，最常用的是乙醇。金属络合沉淀法可用氯化铜、醋酸铅等作络合剂。季铵盐沉淀法可用于香菇溶解离心后的上清液中，使用季铵盐作为沉淀剂至沉淀完全。
卢日峰等研究表明，三氯乙酸结合乙醇分级沉淀法效果好，在多糖含量和回收率的角度上效果明显，比有机溶剂法有优势[8]。朱德艳等对几种香菇多糖纯化方法进行比较认为，虽然层析法分离得到的香菇多糖纯度较高，但是操作设备价格很高，不是最经济实惠的方法。各种方法对香菇多糖的纯化都是优缺点并存，实际操作时应根据分子量和纯度的差异来寻找最适合的方法[9]。
3 展望
LNT在很多疾病的治疗上都有很大益处，参与增强免疫调节、发挥协同抗肿瘤作用、抗病毒和抗感染等方面也有探索。然而香菇多糖的提取和纯化是所有香菇多糖试验成功的根本保证，也是影响临床用药效果的依据，选择合适提取纯化方法降低香菇多糖损失率是关键。既然香菇多糖在抗肿瘤的治疗中不能独当一面，香菇多糖免疫调节作用又尤为明显，所以今后我们可以从降低肿瘤的发生率着手研究，将香菇多糖研制为休闲保健食品进行开发与利用。把降低肿瘤发病率，香菇多糖保健品，增强人体抵抗力这三者形成一个对人体有益的循环，对人类健康的保护也会起到不可估量的作用。
参考文献
[1]吕国英，范雷法，张作法，潘慧娟.香菇多糖研究进展[J].浙江农业学报，2009，02：183-188.
[2]Ren L，Perera C，Hemar Y Antitumor activity of mushroom polysaccharides： a review.Food Funct 2012 Oct3（11）：1118-30.
[3] Chen YW，Hu DJ，Cheong KL，et al. Quality evaluation of lentinan injection produced in China.J Pharm Biomed Anal，2013 Feb；78-79C：176-182.
[4]范曉良，颜继忠，阮伟峰.香菇多糖的提取、分离纯化及结构分析研究进展[J].海峡药学，2012（05）：5-8.
[5]张锴正，杨跃寰，李光辉.香菇多糖提取方法研究进展[J].四川理工学院学报（自然科学版），2009（06）：69-72.
[6]张军霞，胡喜巧.香菇多糖几种提取方法比较[J].河南科技学院学报（自然科学版），2008，36（01）：50-54.
[7]田洪芸，任雪梅，周传静，等.陶瓷膜超滤纯化香菇多糖及其相对分子质量的测定[J].山东农业科学，2013，45（11）：121-125.
[8]卢日峰，王欣，郭丽，等.两种方法纯化香菇多糖的对比研究[J].中国实验诊断学，2008，12（04）：66-68.
[9]朱德艳.几种香菇多糖纯化方法的比较[J].农产品加工创新版，2009（04）：16-17.
【关键词】 香菇多糖 生物活性 分离 纯化
前言
食用真菌可作为世界名贵的药材，香菇（Lentinusedodes）有菌中皇后的美称，从中分离纯化出来对人体有益的大分子物质——香菇多糖，它是由几十到几万个单糖组成，β-D（1→3）葡聚糖残基构成主链，侧链则是由（1→6）葡聚糖残基构成[1]。LNT为灰白色粉末，对光和热稳定，不溶于乙醇，丙酮，乙醚等有机溶剂，可溶于弱碱，极易溶于热水，同时也具有一定的吸湿性，在分离提取后需要密封保存。LNT作为一种特殊免疫佐剂可以识别胸腺依赖的T细胞和巨噬细胞促使淋巴细胞活化因子的产生，导致胸腺向外周血释放淋巴细胞的数量增多[2]。
受遗传、自然环境污染及饮酒、吸烟等因素的影响，全球肿瘤类疾病的发生率直线上升。香菇多糖注射剂作用迅速，可靠性强，吸收效果好，比口服药物疗效显著，在抗肿瘤方面应用广泛[3]。然而香菇多糖注射剂对提取的LNT纯度要求高，不同的分离纯化方法得到的香菇多糖纯度有很大差别，直接影响以LNT为研究对象的试验结果。因此，选择既经济又高效的提取方法对充分实现LNT的生物学活性有重要意义。
1 香菇多糖的分离
LNT分离方法常用的有活性酶去除其他结构的复合酶解法，用酸或碱萃取的浸提法，利用微波能破裂细胞释放所需物质的微波提取法等。酸或碱易破坏多糖的结构，此方法难以控制酸碱度范围，故不常选用，最常用的是水提醇沉法，将香菇碎裂放入热水中浸提后过滤，滤渣反复提取多次，弃滤渣留滤液，加入3倍体积的95%乙醇离心、过滤，将滤液浓缩、烘干即得粗多糖[4]。纤维素酶和果胶酶作为酶法中的复合酶常被用来酶解细胞表面结构充分释放多糖，酶法通常得率较高。微波法是新型提取多糖的方法，提取工艺简单，节能省时，但是最佳微波时间没有得到精确数据，还有待进一步研究[5]。
张军霞等人做出试验研究，在复合酶解的基础上，结合热水浸提，加入酸处理步骤，此复合方法效果更显著，增加了多糖及还原性寡糖的浸提率，复合酶解时溶液的酸碱度保持在5.0左右，在90℃的热水中酶解80分钟，浸提时间在100分钟以内为最佳提取条件[6]。实际生产中，根据实验的要求，选择合适的方法，既能提高提取率又能充分利用资源。
2 香菇多糖纯化
纯化香菇多糖的方法常选使用滤膜过滤的超滤法、加沉淀剂的沉淀法、根据两相系统理化差别的层析法等。超滤法中膜分离技术可除去大部分小分子杂质，且分级效果好，有利于后期精制。超滤技术所用的有机或无机超滤膜是关键，多糖经有机超滤膜纯化后在纯度和色泽上比较好，但要严格限制有机膜自身因素防止造成大分子多糖污染，提高纯化效率选用无机超滤膜则更好[7]。溶剂沉淀法对实验室的要求不高，方便操作但易引入其他物质。醇类和酮类是分级沉淀法中常选用的沉淀剂，最常用的是乙醇。金属络合沉淀法可用氯化铜、醋酸铅等作络合剂。季铵盐沉淀法可用于香菇溶解离心后的上清液中，使用季铵盐作为沉淀剂至沉淀完全。
卢日峰等研究表明，三氯乙酸结合乙醇分级沉淀法效果好，在多糖含量和回收率的角度上效果明显，比有机溶剂法有优势[8]。朱德艳等对几种香菇多糖纯化方法进行比较认为，虽然层析法分离得到的香菇多糖纯度较高，但是操作设备价格很高，不是最经济实惠的方法。各种方法对香菇多糖的纯化都是优缺点并存，实际操作时应根据分子量和纯度的差异来寻找最适合的方法[9]。
3 展望
LNT在很多疾病的治疗上都有很大益处，参与增强免疫调节、发挥协同抗肿瘤作用、抗病毒和抗感染等方面也有探索。然而香菇多糖的提取和纯化是所有香菇多糖试验成功的根本保证，也是影响临床用药效果的依据，选择合适提取纯化方法降低香菇多糖损失率是关键。既然香菇多糖在抗肿瘤的治疗中不能独当一面，香菇多糖免疫调节作用又尤为明显，所以今后我们可以从降低肿瘤的发生率着手研究，将香菇多糖研制为休闲保健食品进行开发与利用。把降低肿瘤发病率，香菇多糖保健品，增强人体抵抗力这三者形成一个对人体有益的循环，对人类健康的保护也会起到不可估量的作用。
参考文献
[1]吕国英，范雷法，张作法，潘慧娟.香菇多糖研究进展[J].浙江农业学报，2009，02：183-188.
[2]Ren L，Perera C，Hemar Y Antitumor activity of mushroom polysaccharides： a review.Food Funct 2012 Oct3（11）：1118-30.
[3] Chen YW，Hu DJ，Cheong KL，et al. Quality evaluation of lentinan injection produced in China.J Pharm Biomed Anal，2013 Feb；78-79C：176-182.
[4]范曉良，颜继忠，阮伟峰.香菇多糖的提取、分离纯化及结构分析研究进展[J].海峡药学，2012（05）：5-8.
[5]张锴正，杨跃寰，李光辉.香菇多糖提取方法研究进展[J].四川理工学院学报（自然科学版），2009（06）：69-72.
[6]张军霞，胡喜巧.香菇多糖几种提取方法比较[J].河南科技学院学报（自然科学版），2008，36（01）：50-54.
[7]田洪芸，任雪梅，周传静，等.陶瓷膜超滤纯化香菇多糖及其相对分子质量的测定[J].山东农业科学，2013，45（11）：121-125.
[8]卢日峰，王欣，郭丽，等.两种方法纯化香菇多糖的对比研究[J].中国实验诊断学，2008，12（04）：66-68.
[9]朱德艳.几种香菇多糖纯化方法的比较[J].农产品加工创新版，2009（04）：16-17.