【摘 要】
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目的 研究心肌线粒体三磷腺苷敏感性钾离子通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,MitoKATPC)开放剂二氮嗪(diazoxide,DE)添加入Celsior液中对大鼠供心超时冷
【机 构】
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浙江省器官移植重点实验室(心脏分室)浙江省人民医院心脏中心,杭州,310014
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目的 研究心肌线粒体三磷腺苷敏感性钾离子通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,MitoKATPC)开放剂二氮嗪(diazoxide,DE)添加入Celsior液中对大鼠供心超时冷保存的效果,并探讨其抗心肌凋亡作用的可能机制.方法 SD大鼠112 只,随机分成7组,每组16只(供者、受者各8只).(1)Celsior组:保存液为单纯Celsior液;(2)DE组:保存液为30 μmol/L DE+Celsior 液;上述两组又以保存时间不同分为5 h、8 h、10 h组.(3)5-HD组:保存液为Celsior液+DE (30 μmol/L)+5-HD(100 μmol/L),保存时间为5 h.利用改良Heron法建立大鼠颈部异位心脏移植模型,观察移植术后5 min内心脏恢复跳动、心率表现;采用原位末端标记染色法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学方法检测心肌Fas/FasL和Caspase-3蛋白的表达情况;以及用电镜观察心肌超微结构等.结果 (1)除5 h保存时间的心脏外,DE各组心脏移植术后30 s复跳率较相应Celsior液组显著提高;DE组心率明显较Celsior液组快(P0.05);(2)与Celsior液组相比,DE处理明显降低各组心肌细胞凋亡指数(P<0.05),减少Fas/FasL和Caspase-3蛋白的表达(均为P0.05);(3)5-HD可取消上述DE的作用;(4)DE各组和Celsior 5 h组心肌超微结构保护相对较佳:肌纤维排列整齐,肌节清,线粒体肿胀不明显,嵴结构较为清楚;Celsior 10 h组心肌结构尚清楚,但肌纤维疏松,个别区域肌丝肌节溶解,线粒体肿胀较明显,嵴模糊.结论 DE强化Celsior液冷保存的鼠供心,可能通过激活MitoKATPC,明显抑制Fas/FasL和Caspase-3蛋白的表达,保护线粒体功能和结构的完整,从而使心肌细胞凋亡减少,减轻缺血再灌注损伤,使得DE强化Celsior液超时(10 h)冷保存的鼠供心移植安全有效.
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