评价神经连接蛋白-1(NL-1)在瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏时脊髓背角含GluRl亚基的AMPA受体膜转运中的作用。
方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠40只,8~10周龄,体重18~22 g。采用随机数字表法分为5组(n=8):对照组(C组)、NL-1-shRNA质粒组(NL组)、切口痛+瑞芬太尼组(I+R组) 、切口痛+瑞芬太尼+空白载体组(I+R+B组)和切口痛+瑞芬太尼+NL-1-shRNA质粒组(I+R+NL组)。I+R+B组鞘内注射阴性慢病毒,NL组和I+R+NL组鞘内注射NL-1-shRNA慢病毒,1×108 IFU/ml,10 μl,1次/d,连续3 d;C组和I+R组于相同时点鞘内注射10 μl生理盐水。待稳定转染后,C组和NL组尾静脉注射生理盐水0.1 ml,连续4次,间隔15 min;I+R组、I+R+B组和I+R+NL组尾静脉注射瑞芬太尼10 μg/kg,0.1 ml,连续4次,间隔15 min,并于第1次给药后制备切口痛模型。分别于输注生理盐水或瑞芬太尼前24 h(T0)、输注停止后3、6、24和48 h(T1-4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热甩尾潜伏期(TFL)。于T4时测定痛阈后处死各组小鼠,取脊髓背角L4-6节段,测定NL-1及其mRNA和AMPA受体的表达水平,计算膜蛋白和总蛋白AMPA受体表达的比值(m/t比值)。
结果与C组比较,I+R组和I+R+B组T1-4时MWT降低,TFL缩短,脊髓背角NL-1及其mRNA、脊髓总蛋白及膜蛋白含GluR1的AMPA受体表达上调,m/t比值增加(P<0.05);与I+R组和I+R+B组比较,I+R+NL组T1-4时MWT增加,TFL延长,脊髓背角NL-1及其mRNA、脊髓膜蛋白和总蛋白AMPA受体表达下调,m/t比值降低(P<0.05)。
结论脊髓背角NL-1可促进含GluRl亚基的AMPA受体向细胞膜转运,参与了瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏形成和维持的过程。