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【摘要】目的：建立蚕沙药材薄层色谱鉴别方法。方法：以1-脱氧野尻霉素、派可林酸为对照品，通过优化显色剂、展开剂及检视等条件，筛选出最佳薄层鉴别条件。结果：所有批次蚕沙药材均能检出1-脱氧野尻霉素和派可林酸，且斑点清晰、分离度高、重复性好。结论：该法可行性，专属性强，可用于蚕沙药材的质量控制。
【关键词】蚕沙；1-脱氧野尻霉素；派可林酸；薄层鉴别
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0018-02
Abstract：Objective To resrarch and establish a TLC indentification method for Faeces Bombycis. Methods With 1-deoxynojirmycin and Pipecoline acid as the reference， select the optimal conditions for TLC by optimizing the Chromogenic agent， exopand agent， view conditions and so on. Results All batches of Faeces Bombycis can be detected 1-deoxynojirimycin and Pipecoline acid， the spots were clear and it has good separation and repeatability. Conclusion This method that is feasible， and has strong specificity can be used for the quality control standards of Faeces Bombycis.
Keywords：Faeces Bombycis； 1-deoxynojirmycin； Pipecoline acid； TLC identification
蚕沙为蚕蛾科昆虫家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便，具有祛风除湿、活血定痛的功效，用于风湿痹痛、关节不遂、皮肤不仁、腰腿冷痛、风疹瘙痒、头风头痛、烘弦风眼[1]。现代药理和临床研究表明蚕沙有抗肿瘤、降血糖、改善和治疗贫血作用，并且成功地开发了金糖尿胶囊、生血宁片。其中1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）和派可林酸为蚕沙降血糖、抗肿瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材（第一册）采用TLC鉴别了蚕沙药材中含有的β-谷甾醇成分，为了更好地控制蚕沙药材质量，我们以1-DNJ和派可林酸为对照品，对蚕沙TLC鉴别条件进行了研究，为其质量标准的制定提供依据。现将结果报道如下。
1材料与仪器
11仪器薄层色谱数码成像系统（瑞士CAMAG公司）；超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司，型号HX-06）；硅胶G薄层板（产自德国Merck默克公司）；电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）。
12试药蚕沙药材分别购自长沙市岳麓区高新大药房、济仁堂大药房、永康堂大药房、湖南上药九旺医药有限公司，均由湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定为家蚕Bonbyx mori L的干燥粪便；1-DNJ对照品（批号：MUST-1305502，纯度>98%），购自成都曼思特生物科技有限公司；派可林酸对照品（批号：111751-200601）和蚕沙对照药材（批号：121419-200501）均购自中国药品生物制品检定研究院；其余所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
211-DNJ薄层鉴别取蚕沙药材约2g，加水20mL，加热回流20min，滤过，滤液蒸干，残渣加70%乙醇5ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取1-DNJ对照品适量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、1-DNJ对照品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（16：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
22派可林酸的薄层鉴别取派可林酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含 025mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、派可林酸对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
3讨论
311-DNJ和派可林酸为降血糖的药效物质，同时1-DNJ也是抗肿瘤、艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）的药效物质，故以此2种成分来衡量蚕沙药材质量的优劣比β-谷甾醇更加合理。
32显色剂的选择[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均无不饱和结构，不能采用紫外光灯进行检视，且GF254板也未检测到特征斑点，最后决定选用日光检视。1-DNJ为生物碱类成分，常用显色剂为改良碘化铋钾试液、吲哚醌试液；派可林酸为氨基酸类成分，常用显色剂为茚三酮试液。试验结果表明，上述显色剂对1-DNJ不灵敏，经过反复试验，发现样品与1-DNJ对照品用茚三酮试液显色，加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏，日光下检视，可增加显色的灵敏性。因此，采用茚三酮试液和碘蒸气作为1-DNJ的显色剂；茚三酮试液对派可林酸显紫色斑点，灵敏性好、专属性强，所以选茚三酮试液作为派可林酸的显色剂。
33展开剂的选择1-DNJ分子含有多个羟基，具有较强的极性。因此，考虑采用①乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）；②乙酸乙酯-无水乙醇（1：2）；③三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）；④正丁醇-醋酸-水（6：1：1）作为展开剂进行试验。以乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）的展开系统，分离得到的斑点最多。所以确定用乙酸乙酯-甲酸-水为展开系统，分别采用（16：3：1）、（16：4：1）、（16：5：1）不同比例进行比较，经过多次试验，确定以（16：4：1）的分离度及Rf值最为合适。派可林酸分子中含有羧基，极性较强。采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）和三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）作为展开剂进行试验，结果发现，三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）的展开系统，分离得到的斑点分离度好，斑点非常清晰。考虑到三氯甲烷的毒性，换用二氯甲烷进行试验，但是斑点的分离度不够好。所以，最后确定以三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）为展开剂。
34耐用性试验选用不同厂家的硅胶G板进行了比较，结果市售4个批次的蚕沙药材与蚕沙对照药材试验均与1-DNJ和派可林酸对照品相应的位置上显相同颜色斑点，且分离度好。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药材第一册[M].1992：69.
[2] 苏凤莲.高效液相色谱法测定金糖宁胶中派可林酸的含量[J].海峡药学，2001，13（3）：42.
[3] 梁明，王鹏，张会慧，等.1-脱氧野尻霉素的研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（17）：9222.
[4] 李晓伟，易智彪，曾宝，等.巴豆生物碱薄层色谱鉴别研究[J].北方药学，2013，10（2）：3.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：3.
（收稿日期：20131128）
【关键词】蚕沙；1-脱氧野尻霉素；派可林酸；薄层鉴别
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0018-02
Abstract：Objective To resrarch and establish a TLC indentification method for Faeces Bombycis. Methods With 1-deoxynojirmycin and Pipecoline acid as the reference， select the optimal conditions for TLC by optimizing the Chromogenic agent， exopand agent， view conditions and so on. Results All batches of Faeces Bombycis can be detected 1-deoxynojirimycin and Pipecoline acid， the spots were clear and it has good separation and repeatability. Conclusion This method that is feasible， and has strong specificity can be used for the quality control standards of Faeces Bombycis.
Keywords：Faeces Bombycis； 1-deoxynojirmycin； Pipecoline acid； TLC identification
蚕沙为蚕蛾科昆虫家蚕Bonbyx mori L.的干燥粪便，具有祛风除湿、活血定痛的功效，用于风湿痹痛、关节不遂、皮肤不仁、腰腿冷痛、风疹瘙痒、头风头痛、烘弦风眼[1]。现代药理和临床研究表明蚕沙有抗肿瘤、降血糖、改善和治疗贫血作用，并且成功地开发了金糖尿胶囊、生血宁片。其中1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）和派可林酸为蚕沙降血糖、抗肿瘤、抗病毒的有效成分[2、3]。《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材（第一册）采用TLC鉴别了蚕沙药材中含有的β-谷甾醇成分，为了更好地控制蚕沙药材质量，我们以1-DNJ和派可林酸为对照品，对蚕沙TLC鉴别条件进行了研究，为其质量标准的制定提供依据。现将结果报道如下。
1材料与仪器
11仪器薄层色谱数码成像系统（瑞士CAMAG公司）；超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司，型号HX-06）；硅胶G薄层板（产自德国Merck默克公司）；电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）。
12试药蚕沙药材分别购自长沙市岳麓区高新大药房、济仁堂大药房、永康堂大药房、湖南上药九旺医药有限公司，均由湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定为家蚕Bonbyx mori L的干燥粪便；1-DNJ对照品（批号：MUST-1305502，纯度>98%），购自成都曼思特生物科技有限公司；派可林酸对照品（批号：111751-200601）和蚕沙对照药材（批号：121419-200501）均购自中国药品生物制品检定研究院；其余所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
211-DNJ薄层鉴别取蚕沙药材约2g，加水20mL，加热回流20min，滤过，滤液蒸干，残渣加70%乙醇5ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取1-DNJ对照品适量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、1-DNJ对照品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（16：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
22派可林酸的薄层鉴别取派可林酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含 025mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述供试品溶液10μl、派可林酸对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
3讨论
311-DNJ和派可林酸为降血糖的药效物质，同时1-DNJ也是抗肿瘤、艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）的药效物质，故以此2种成分来衡量蚕沙药材质量的优劣比β-谷甾醇更加合理。
32显色剂的选择[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均无不饱和结构，不能采用紫外光灯进行检视，且GF254板也未检测到特征斑点，最后决定选用日光检视。1-DNJ为生物碱类成分，常用显色剂为改良碘化铋钾试液、吲哚醌试液；派可林酸为氨基酸类成分，常用显色剂为茚三酮试液。试验结果表明，上述显色剂对1-DNJ不灵敏，经过反复试验，发现样品与1-DNJ对照品用茚三酮试液显色，加热至斑点明显后，再置碘蒸气中熏，日光下检视，可增加显色的灵敏性。因此，采用茚三酮试液和碘蒸气作为1-DNJ的显色剂；茚三酮试液对派可林酸显紫色斑点，灵敏性好、专属性强，所以选茚三酮试液作为派可林酸的显色剂。
33展开剂的选择1-DNJ分子含有多个羟基，具有较强的极性。因此，考虑采用①乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）；②乙酸乙酯-无水乙醇（1：2）；③三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）；④正丁醇-醋酸-水（6：1：1）作为展开剂进行试验。以乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）的展开系统，分离得到的斑点最多。所以确定用乙酸乙酯-甲酸-水为展开系统，分别采用（16：3：1）、（16：4：1）、（16：5：1）不同比例进行比较，经过多次试验，确定以（16：4：1）的分离度及Rf值最为合适。派可林酸分子中含有羧基，极性较强。采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）和三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）作为展开剂进行试验，结果发现，三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）的展开系统，分离得到的斑点分离度好，斑点非常清晰。考虑到三氯甲烷的毒性，换用二氯甲烷进行试验，但是斑点的分离度不够好。所以，最后确定以三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）为展开剂。
34耐用性试验选用不同厂家的硅胶G板进行了比较，结果市售4个批次的蚕沙药材与蚕沙对照药材试验均与1-DNJ和派可林酸对照品相应的位置上显相同颜色斑点，且分离度好。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药材第一册[M].1992：69.
[2] 苏凤莲.高效液相色谱法测定金糖宁胶中派可林酸的含量[J].海峡药学，2001，13（3）：42.
[3] 梁明，王鹏，张会慧，等.1-脱氧野尻霉素的研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（17）：9222.
[4] 李晓伟，易智彪，曾宝，等.巴豆生物碱薄层色谱鉴别研究[J].北方药学，2013，10（2）：3.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：3.
（收稿日期：20131128）