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摘要：目的 是比较BioVue微柱凝胶法与传统试管法在检测O型孕妇IgG血型抗体效价中的差异，观察BioVue微柱凝胶法检查孕妇血清中lgG抗A（B）血型抗体效价的灵敏度和特异性。 方法 分别用微柱凝胶法和传统试管法检测200例与丈夫ABO血型不合的O型孕妇血清IgG抗-A（B）效价水平。 结果 采用凝胶法，200例孕妇中145例（72.5%）IgG抗A（B）效价≥64，48例（24%）≥128，7例（3.5%）≥256。传统试管法仅60例（30%）IgG抗A（B）效价≥64，18例（9%）杭体效价≥128，3例（1.5%）≥256。微柱凝胶法检测孕妇产前抗体效价显示IgG抗A明显高于IgG抗B，两者结果显著性差异（t=2.76，P<0.05）。 结论 BioVue微柱凝胶法检测孕妇产前抗体效价比试管法检测凝集强度高。灵敏度和特异性优于传统试管法。具有快速、简单、准确的优点。
关键词：微柱凝胶法;IgG抗体;孕妇
新生儿溶血病（hemolytic disease of the fetus and the newborn，HDN）是指由于母子血型不合，母亲体内产生与胎儿血型抗原不配的血型抗体，为IgG抗A（B），这种抗体通过胎盘进入到胎儿体内引起同族免疫性溶血，严重者可导致死亡，常见Rh血型系统和ABO血型系统的血型不合[1]。检测孕妇体内的 IgG型抗-A和抗-B效价可以帮助医生预测发生ABO血型系统 HDN 的可能性。目前，传统的检测方法为试管法抗人球蛋白试验（简称试管法），此方法操作繁琐，重复性差，近年来逐渐被微柱凝胶法所代替。本研究选取具有代表性的BioVue 抗人球蛋白检测卡和传统试管法对我院 200例孕妇血清进行 IgG 抗-A（B）效价平行对比试验，比较这两种方法的准确、灵敏度，进行对比研究，结果报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象 2010年1月一2014年6月来本院进行产前检查的妊娠20周左右的200例孕妇，血型为 O 型 RhD 阳性，配偶血型均为非O型做抗体效价测定。
1.2 仪器试剂 （1）试管法：5% 标准 A、B 型红细胞悬液、抗人球蛋白试剂（上海血液医药有限公司），普通水浴箱（上海新苗医疗）及离心机（贝索）。（2）凝胶抗人球蛋白试验：1%标准 A、B 型红细胞悬液（上海血液医药），BioVue 抗人球蛋白检测卡及其专用孵育器及专用离心机（强生公司）。
1.3 方法
1.3.1 标本处理：取小试管10支，分别编号1-10，各管加人生理盐水或缓冲液0.2ml。经血型物质中和后的待检母亲血清（浆）0.2ml加人到第1管混匀后移出0.2ml转至第2管，以同样操作稀释至第10管，最后管吸出0.2ml弃去。各管的稀释度分别为1：2、1：4、1：8、l：16、……1：1024倍。
1.3.2 试管法：于各管中分别加人经洗涤后的受检者丈夫或血型相对应者浓度为3%-5%的红细胞悬液0.2ml。离心后肉眼观察到“+ ”凝集的最高稀释度的倒数为抗体效价。
1.3.3 BioVue微柱凝胶法：上述试验试管从未凝集管开始，以后各管分别吸出40μl加入到抗人球蛋白卡的各微柱中，依次编号后置于37C孵育15min致敏，经配套专用离心機离心抗人球蛋白卡，5min后直接观察结果。
1.4 统计学方法 行X列表资料x2检验和t检验。
2 结果
2.1 微柱凝胶法与传统试管法对照测定
采用微柱凝胶法，216例孕妇中155例（71.8%）IgG抗A（B）效价≥64，62例（28.7%）≥128，8例（3.7%）≥256。传统试管法仅69例（32%）IgG抗A（B）效价≥64，22例（10%）抗体效价≥128，3例（1.4%）≥256。见表1。
表1 微柱凝胶法与传统试管法IgG抗体效价比较
检测方法 n
IgG抗体效价
1：2
1：4
1：8
1：16
1：32
1：64
1：128
1：256
1：512
1：1024
传统试验法 200
3
9
17
39
50
60
18
3
1
-
微柱凝胶法 200
3
3
5
12
27
145
48
7
3
1
微柱凝胶法与传统试管法抗体效价比较 P<0.05
2.2 微柱凝胶法检测216对夫妇血型与孕妇抗A（B）效价，分布见表2。
丈夫血型与孕妇IgG抗A（B）效价检测结果关系 夫妇A-O型与B-O型孕妇IgG抗A、IgG抗B平均效价分别为98.3、71.1，IgG抗A效价明显高于IgG抗B效价，两者结果差异有统计学意义（t=2.76，P<0.05）。
表2 200例O型孕妇IgG抗A（B）效价比较
血型 n （夫妇）
IgG抗A（B）效价
≤32
64
128
≥256
评价效价
A-O 120
32
92
45
6
97.5
B-O 120
30
67
37
3
70.2
夫妇A-O型与B-O型孕妇IgG抗A、IgG抗B比较，t=2.76.P<0.05
3 讨论
HDN 是由于与母亲血型不合的胎儿红细胞进入母体并刺激母体产生 IgG 类免疫抗体所致，0型孕妇个体血清中针对ABO血型物质的IgG类型的抗A和抗B抗体，其分子量小，是唯一能够通过胎盘屏障进人胎儿体内的免疫球蛋白[2]，所引起的黄疸可能导致患儿不可逆的损伤，严重时甚至危及生命。母体 IgG 型抗-A（B）效价水平的高低与胎儿 HDN 的发病率和症状轻重具有一定的相关性[3，4]，即如果母体内 IgG 型抗-A（B）效价随着孕期的增长而增高，则提示胎儿发生 HDN 的可能性增大，以及患病后的溶血程度增加。因此，孕期检测母体的 IgG 型抗-A（B）效价水平对于预测HDN 发生及胎儿的可能受害程度具有重要的意义。此外，发生新生儿溶血病的程度取决于父亲的血型以及母亲所对应的抗体效价。我们采用微柱凝胶法检测显示A-0型孕妇的IgG抗A平均效价明显高于IgG抗B型夫妇的平均效价，两者差异有统计学意义。该结果表明在实际工作中对A-0型夫妇更应予以足够的重视。
试管法已经沿用了半个世纪，在检测孕妇IgG 血型效价方面是最经典、最可靠的方法，但该法操作复杂繁琐、试验时间较长、结果难以准确判断、不易自动化等缺点。微柱凝膠技术是一种新型的免疫学技术[5]，采用单克隆抗体，纯度和浓度均高，更容易捕获相应抗原，同时微柱凝胶法的密度梯度液层可洗涤红细胞，防止杂蛋白混人干扰，更容易暴露出靶抗原，微小的玻璃层使凝集的红细胞更加便于判断[6]，是免疫学技术和凝胶分子筛技术的结合，具备较高的临床应用价值。
本试验结果显示，微柱凝胶法较传统试管法平均提高2-3个滴度。当母亲血清中lgG抗-A（B）效价≥64时婴儿有受害机会，当效价≥128时新生儿可能受害[7]，采用微柱凝胶法后，由于灵敏度和特异性得到提高，效价（滴度）也随之提高。因此，我们认为在使用微柱凝胶法时以≤128为正常参考值较好，同时配合试管法作为参考。
观察结果表明，采用操作简便、敏感性高的微柱凝胶法对母体血清lgG抗体效价的检测，可以预测胎儿在妊娠期间发生免疫性溶血病的危险性，便于早期诊断、早期治疗，以减轻胎儿免疫性溶血病的损害程度，达到优生优育的目的，此项检查可在基层单位进行推广和应用。
参考文献：
[1]胡亚美，江载芳，诸福堂.实用儿科学[M]7 版.北京：人民卫生出版社，2003：477-480.
[2]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社，1998：205.
[3]叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程[M].3 版.南京：东南大学出版社，2006：257 -266.
关键词：微柱凝胶法;IgG抗体;孕妇
新生儿溶血病（hemolytic disease of the fetus and the newborn，HDN）是指由于母子血型不合，母亲体内产生与胎儿血型抗原不配的血型抗体，为IgG抗A（B），这种抗体通过胎盘进入到胎儿体内引起同族免疫性溶血，严重者可导致死亡，常见Rh血型系统和ABO血型系统的血型不合[1]。检测孕妇体内的 IgG型抗-A和抗-B效价可以帮助医生预测发生ABO血型系统 HDN 的可能性。目前，传统的检测方法为试管法抗人球蛋白试验（简称试管法），此方法操作繁琐，重复性差，近年来逐渐被微柱凝胶法所代替。本研究选取具有代表性的BioVue 抗人球蛋白检测卡和传统试管法对我院 200例孕妇血清进行 IgG 抗-A（B）效价平行对比试验，比较这两种方法的准确、灵敏度，进行对比研究，结果报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象 2010年1月一2014年6月来本院进行产前检查的妊娠20周左右的200例孕妇，血型为 O 型 RhD 阳性，配偶血型均为非O型做抗体效价测定。
1.2 仪器试剂 （1）试管法：5% 标准 A、B 型红细胞悬液、抗人球蛋白试剂（上海血液医药有限公司），普通水浴箱（上海新苗医疗）及离心机（贝索）。（2）凝胶抗人球蛋白试验：1%标准 A、B 型红细胞悬液（上海血液医药），BioVue 抗人球蛋白检测卡及其专用孵育器及专用离心机（强生公司）。
1.3 方法
1.3.1 标本处理：取小试管10支，分别编号1-10，各管加人生理盐水或缓冲液0.2ml。经血型物质中和后的待检母亲血清（浆）0.2ml加人到第1管混匀后移出0.2ml转至第2管，以同样操作稀释至第10管，最后管吸出0.2ml弃去。各管的稀释度分别为1：2、1：4、1：8、l：16、……1：1024倍。
1.3.2 试管法：于各管中分别加人经洗涤后的受检者丈夫或血型相对应者浓度为3%-5%的红细胞悬液0.2ml。离心后肉眼观察到“+ ”凝集的最高稀释度的倒数为抗体效价。
1.3.3 BioVue微柱凝胶法：上述试验试管从未凝集管开始，以后各管分别吸出40μl加入到抗人球蛋白卡的各微柱中，依次编号后置于37C孵育15min致敏，经配套专用离心機离心抗人球蛋白卡，5min后直接观察结果。
1.4 统计学方法 行X列表资料x2检验和t检验。
2 结果
2.1 微柱凝胶法与传统试管法对照测定
采用微柱凝胶法，216例孕妇中155例（71.8%）IgG抗A（B）效价≥64，62例（28.7%）≥128，8例（3.7%）≥256。传统试管法仅69例（32%）IgG抗A（B）效价≥64，22例（10%）抗体效价≥128，3例（1.4%）≥256。见表1。
表1 微柱凝胶法与传统试管法IgG抗体效价比较
检测方法 n
IgG抗体效价
1：2
1：4
1：8
1：16
1：32
1：64
1：128
1：256
1：512
1：1024
传统试验法 200
3
9
17
39
50
60
18
3
1
-
微柱凝胶法 200
3
3
5
12
27
145
48
7
3
1
微柱凝胶法与传统试管法抗体效价比较 P<0.05
2.2 微柱凝胶法检测216对夫妇血型与孕妇抗A（B）效价，分布见表2。
丈夫血型与孕妇IgG抗A（B）效价检测结果关系 夫妇A-O型与B-O型孕妇IgG抗A、IgG抗B平均效价分别为98.3、71.1，IgG抗A效价明显高于IgG抗B效价，两者结果差异有统计学意义（t=2.76，P<0.05）。
表2 200例O型孕妇IgG抗A（B）效价比较
血型 n （夫妇）
IgG抗A（B）效价
≤32
64
128
≥256
评价效价
A-O 120
32
92
45
6
97.5
B-O 120
30
67
37
3
70.2
夫妇A-O型与B-O型孕妇IgG抗A、IgG抗B比较，t=2.76.P<0.05
3 讨论
HDN 是由于与母亲血型不合的胎儿红细胞进入母体并刺激母体产生 IgG 类免疫抗体所致，0型孕妇个体血清中针对ABO血型物质的IgG类型的抗A和抗B抗体，其分子量小，是唯一能够通过胎盘屏障进人胎儿体内的免疫球蛋白[2]，所引起的黄疸可能导致患儿不可逆的损伤，严重时甚至危及生命。母体 IgG 型抗-A（B）效价水平的高低与胎儿 HDN 的发病率和症状轻重具有一定的相关性[3，4]，即如果母体内 IgG 型抗-A（B）效价随着孕期的增长而增高，则提示胎儿发生 HDN 的可能性增大，以及患病后的溶血程度增加。因此，孕期检测母体的 IgG 型抗-A（B）效价水平对于预测HDN 发生及胎儿的可能受害程度具有重要的意义。此外，发生新生儿溶血病的程度取决于父亲的血型以及母亲所对应的抗体效价。我们采用微柱凝胶法检测显示A-0型孕妇的IgG抗A平均效价明显高于IgG抗B型夫妇的平均效价，两者差异有统计学意义。该结果表明在实际工作中对A-0型夫妇更应予以足够的重视。
试管法已经沿用了半个世纪，在检测孕妇IgG 血型效价方面是最经典、最可靠的方法，但该法操作复杂繁琐、试验时间较长、结果难以准确判断、不易自动化等缺点。微柱凝膠技术是一种新型的免疫学技术[5]，采用单克隆抗体，纯度和浓度均高，更容易捕获相应抗原，同时微柱凝胶法的密度梯度液层可洗涤红细胞，防止杂蛋白混人干扰，更容易暴露出靶抗原，微小的玻璃层使凝集的红细胞更加便于判断[6]，是免疫学技术和凝胶分子筛技术的结合，具备较高的临床应用价值。
本试验结果显示，微柱凝胶法较传统试管法平均提高2-3个滴度。当母亲血清中lgG抗-A（B）效价≥64时婴儿有受害机会，当效价≥128时新生儿可能受害[7]，采用微柱凝胶法后，由于灵敏度和特异性得到提高，效价（滴度）也随之提高。因此，我们认为在使用微柱凝胶法时以≤128为正常参考值较好，同时配合试管法作为参考。
观察结果表明，采用操作简便、敏感性高的微柱凝胶法对母体血清lgG抗体效价的检测，可以预测胎儿在妊娠期间发生免疫性溶血病的危险性，便于早期诊断、早期治疗，以减轻胎儿免疫性溶血病的损害程度，达到优生优育的目的，此项检查可在基层单位进行推广和应用。
参考文献：
[1]胡亚美，江载芳，诸福堂.实用儿科学[M]7 版.北京：人民卫生出版社，2003：477-480.
[2]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社，1998：205.
[3]叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程[M].3 版.南京：东南大学出版社，2006：257 -266.