葡激酶在变铅青链霉菌中的克隆和分泌表达

来源 :中国医学科学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wdbbzl
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目的构建可分泌表达葡激酶的基因工程链霉菌.方法通过PCR方法扩增得到包括葡激酶结构基因和分泌信号肽基因在内的730 bp的DNA片段,将该片段插入变铅青链霉菌质粒pIJ459的erm强启动子下游,构建重组质粒pIJ459SAK,转化变铅青链霉菌TK54.结果获得含有该重组质粒的基因工程菌株,经发酵培养基培养72 h后,发酵液离心取上清用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见相对分子量约为16 000的特异性蛋白条带;用溶纤平皿法可测得溶纤活性.结论葡激酶已在所构建的基因工程菌中分泌表达且具有溶纤活性.
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