【摘 要】
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目的构建PRL-3基因特异性shRNA慢病毒干扰载体,感染结肠癌SW480细胞,研究PRL-3基因在结肠癌细胞株中的表达抑制情况。方法设计并合成3对特异性针对PRL-3基因的shRNA序列,构建
【机 构】
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宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科,宁夏医科大学总医院生殖医学中心
【基金项目】
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宁夏自然科学基金(NZ13147);宁夏医科大学校级课题(XM2012009)
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目的构建PRL-3基因特异性shRNA慢病毒干扰载体,感染结肠癌SW480细胞,研究PRL-3基因在结肠癌细胞株中的表达抑制情况。方法设计并合成3对特异性针对PRL-3基因的shRNA序列,构建到慢病毒载体中,测序鉴定载体构建情况,转染293T细胞,荧光显微镜下观察转染效率。收集到的病毒上清感染结肠癌SW480细胞,RT-PCR检测各组细胞中PRL-3 mRNA表达水平。结果经测序鉴定成功构建3对PRL-3基因的RNAi重组慢病毒载体,包装、浓缩后其滴度为5×108 TU·mL-1,3对PRL-3 shRNA病毒载体感染结肠癌SW480细胞株后,Real-time PCR显示,各组PRL-3基因敲减效率分别达到89.6%、83.2%和88.8%,PRL-3 shRNA1重组慢病毒载体干扰效率最佳。结论本研究成功构建了靶向PRL-3基因的shRNA慢病毒载体,PRL-3 shRNA1可抑制SW480细胞中PRL-3基因表达水平。
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