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【分类号】：R286
【摘要】 目的 测定清瘟解毒片中芍药苷的含量。方法 采用反相高效液相色谱法，DiamonsilC18柱，甲醇0.05 mol/L KH2PO4（体积比30∶70）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长230 nm，柱温为室温。结果 芍药苷质量浓度在4.95～59.4 μg/mL间具有良好的线性关系（r=0.999 7），芍药苷平均回收率为104.1%，方法精密度（RSD）为0.90%（n=6）。结论 该法可用于清瘟解毒片中芍药苷的含量测定。
【关键词】 清瘟解毒片；芍药苷；高效液相色谱法；含量测定
清瘟解毒片是由天花粉、葛根、白芷、玄参、赤芍等16味中药制成的中药成方制剂，具清瘟解毒之功效。临床用于治疗感冒、发热、怕冷、无汗头痛、口渴咽干、四肢酸痛、痄腮肿痛。该产品现行标准采用HPLC法测定黄芩苷含量，有文献报道用高效液相色谱法测定该制剂中葛根素的含量，但芍药苷含量测定未见文献报道。为进一步评价该制剂的质量，本文建立了清瘟解毒片中芍药苷含量测定的反相高效液相色谱法，该法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦公司），Agilent 1100系列双元泵，Agilent 1100可变波长检测器，Agilent 1100/化学工作站。DL360超声波清洗器（宁波石浦海天电子仪器厂），工作频率（4.5±0.05）kHz，输出功率240 W。
芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736200526），清瘟解毒片（中山市中智制药有限公司，批号：20060921、20060922、20060923，规格：0.6 g/片），甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，水为双蒸水。
2 实验部分
2.1 样品液制备
2.1.1 對照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品19.8 mg，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液 （芍药苷质量浓度为99 μg·mL-1）。
2.1.2 供试品溶液的制备 取清瘟解毒片样品，研细，取约0.25 g，精密称定，精密加水25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.1.3 阴性对照液的制备 取处方组成中除赤芍外的其余成分制成不含赤芍的阴性对照品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱为 DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司），甲醇KH2PO4（体积比30∶70），流速为1.0 mL·min-1，检测波长230 nm，柱温为室温。分别取对照品溶液（芍药苷质量浓度为29.7 μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL注入色谱仪，理论板数以芍药苷峰计算应不低于4 500；芍药苷的拖尾因子为0.94，保留时间约为21.8 min，芍药苷与其他组分可基线分离；阴性样品不干扰样品测定。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线制备 分别吸取一定量的芍药苷对照品贮备液，加甲醇稀释成芍药苷质量浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4 μg·mL-1的溶液。依次进样10 μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得芍药苷回归方程A=11.20ρ-1.48，r=0.999 7。表明芍药苷质量浓度在4.95～59.4 μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.2 精密度试验 取质量浓度为29.7 μg·mL-1的芍药苷对照品溶液10 μL连续测定5次，其峰面积的平均值为326.6，RSD为0.89%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液（20060922）在0、2、4、6、8 h 分别进样10 μL，记录峰面积，结果芍药苷峰面积的平均值为334.6，RSD为1.64%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.3.4 重复性试验 取同一批号（20060922）样品6份，照“2.1.2”方法提取、测定，结果芍药苷平均含量为2.86 mg·g-1，RSD为0.90%。表明分析方法精密度良好。
2.3.5 加样回收试验 精密称取同一批号样品（20060922）共6份，加入相应量的芍药苷对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果芍药苷平均回收率为104.1%，RSD=0.40%，表明本方法准确可靠。
2.4 样品测定
取清瘟解毒片样品3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（29.7 μg·mL-1）与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量。
3 讨 论
3.1 根据芍药苷的溶解性，分别以体积分数50%甲醇、水、体积分数50%乙醇[6]为提取溶剂进行试验，测得芍药苷含量从高到低依次为水、体积分数50%乙醇、体积分数50%甲醇，以水为溶剂含量最高，且达到基线分离，因此以水为提取溶剂。考察了超声提取20、30、40 min对提取率的影响，结果表明，超声提取30 min含量达最高，时间增加，含量反而降低。因为时间过长，芍药苷受热破坏。因此选择超声提取30 min。
3.2 HPLC法测定中药中芍药苷的报道极多，但由于处方各异，所选流动相种类较多。本实验中流动相曾选用乙腈0.1%磷酸溶液、甲醇水，但杂质峰过多，达不到基线分离。经反复实验探索，采用甲醇0.05 mol/L KH2PO4（体积比30∶70）为流动相后，方得满意结果。
【参考文献】
[1] YBZ13212006. 国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].
[2] 霍艳铃，姜鸿，张曦弘. HPLC法测定清瘟解毒片中葛根含量的研究[J]. 中医药学刊，2004，22（4）：752-753.
[3] 陈发奎. 常用中草药有效成分含量测定[M]. 北京：人民卫生出版社，1997：130.
[4] 林生文，李玮玲，朱炳辉. 仲景胃灵片中芍药苷的含量测定[J]. 分析测试学报，2004，23（1）：114-116.
[5] 周淑芳，唐声武，郭力，等. 肛肠命颗粒质量标准的研究[J]. 中草药，1999，30（8）：579.
[6] 毋福海，易军，宋粉云，等. 四物片中芍药苷的HPLC测定[J]. 中国医药工业杂志，2004，35（4）：236-237.
[7] 黄夏敏，彭中芳. 白芍在中成药生产过程中芍药苷含量变化的研究[J]. 中药新药与临床药理，1998，9（4）：236-237.
[8 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2005年版一部[M]. 北京：化学工业出版社，2005：68-69.
【摘要】 目的 测定清瘟解毒片中芍药苷的含量。方法 采用反相高效液相色谱法，DiamonsilC18柱，甲醇0.05 mol/L KH2PO4（体积比30∶70）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长230 nm，柱温为室温。结果 芍药苷质量浓度在4.95～59.4 μg/mL间具有良好的线性关系（r=0.999 7），芍药苷平均回收率为104.1%，方法精密度（RSD）为0.90%（n=6）。结论 该法可用于清瘟解毒片中芍药苷的含量测定。
【关键词】 清瘟解毒片；芍药苷；高效液相色谱法；含量测定
清瘟解毒片是由天花粉、葛根、白芷、玄参、赤芍等16味中药制成的中药成方制剂，具清瘟解毒之功效。临床用于治疗感冒、发热、怕冷、无汗头痛、口渴咽干、四肢酸痛、痄腮肿痛。该产品现行标准采用HPLC法测定黄芩苷含量，有文献报道用高效液相色谱法测定该制剂中葛根素的含量，但芍药苷含量测定未见文献报道。为进一步评价该制剂的质量，本文建立了清瘟解毒片中芍药苷含量测定的反相高效液相色谱法，该法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦公司），Agilent 1100系列双元泵，Agilent 1100可变波长检测器，Agilent 1100/化学工作站。DL360超声波清洗器（宁波石浦海天电子仪器厂），工作频率（4.5±0.05）kHz，输出功率240 W。
芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736200526），清瘟解毒片（中山市中智制药有限公司，批号：20060921、20060922、20060923，规格：0.6 g/片），甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，水为双蒸水。
2 实验部分
2.1 样品液制备
2.1.1 對照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品19.8 mg，置200 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液 （芍药苷质量浓度为99 μg·mL-1）。
2.1.2 供试品溶液的制备 取清瘟解毒片样品，研细，取约0.25 g，精密称定，精密加水25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.1.3 阴性对照液的制备 取处方组成中除赤芍外的其余成分制成不含赤芍的阴性对照品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱为 DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司），甲醇KH2PO4（体积比30∶70），流速为1.0 mL·min-1，检测波长230 nm，柱温为室温。分别取对照品溶液（芍药苷质量浓度为29.7 μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL注入色谱仪，理论板数以芍药苷峰计算应不低于4 500；芍药苷的拖尾因子为0.94，保留时间约为21.8 min，芍药苷与其他组分可基线分离；阴性样品不干扰样品测定。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线制备 分别吸取一定量的芍药苷对照品贮备液，加甲醇稀释成芍药苷质量浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4 μg·mL-1的溶液。依次进样10 μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得芍药苷回归方程A=11.20ρ-1.48，r=0.999 7。表明芍药苷质量浓度在4.95～59.4 μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.2 精密度试验 取质量浓度为29.7 μg·mL-1的芍药苷对照品溶液10 μL连续测定5次，其峰面积的平均值为326.6，RSD为0.89%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液（20060922）在0、2、4、6、8 h 分别进样10 μL，记录峰面积，结果芍药苷峰面积的平均值为334.6，RSD为1.64%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.3.4 重复性试验 取同一批号（20060922）样品6份，照“2.1.2”方法提取、测定，结果芍药苷平均含量为2.86 mg·g-1，RSD为0.90%。表明分析方法精密度良好。
2.3.5 加样回收试验 精密称取同一批号样品（20060922）共6份，加入相应量的芍药苷对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果芍药苷平均回收率为104.1%，RSD=0.40%，表明本方法准确可靠。
2.4 样品测定
取清瘟解毒片样品3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（29.7 μg·mL-1）与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量。
3 讨 论
3.1 根据芍药苷的溶解性，分别以体积分数50%甲醇、水、体积分数50%乙醇[6]为提取溶剂进行试验，测得芍药苷含量从高到低依次为水、体积分数50%乙醇、体积分数50%甲醇，以水为溶剂含量最高，且达到基线分离，因此以水为提取溶剂。考察了超声提取20、30、40 min对提取率的影响，结果表明，超声提取30 min含量达最高，时间增加，含量反而降低。因为时间过长，芍药苷受热破坏。因此选择超声提取30 min。
3.2 HPLC法测定中药中芍药苷的报道极多，但由于处方各异，所选流动相种类较多。本实验中流动相曾选用乙腈0.1%磷酸溶液、甲醇水，但杂质峰过多，达不到基线分离。经反复实验探索，采用甲醇0.05 mol/L KH2PO4（体积比30∶70）为流动相后，方得满意结果。
【参考文献】
[1] YBZ13212006. 国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].
[2] 霍艳铃，姜鸿，张曦弘. HPLC法测定清瘟解毒片中葛根含量的研究[J]. 中医药学刊，2004，22（4）：752-753.
[3] 陈发奎. 常用中草药有效成分含量测定[M]. 北京：人民卫生出版社，1997：130.
[4] 林生文，李玮玲，朱炳辉. 仲景胃灵片中芍药苷的含量测定[J]. 分析测试学报，2004，23（1）：114-116.
[5] 周淑芳，唐声武，郭力，等. 肛肠命颗粒质量标准的研究[J]. 中草药，1999，30（8）：579.
[6] 毋福海，易军，宋粉云，等. 四物片中芍药苷的HPLC测定[J]. 中国医药工业杂志，2004，35（4）：236-237.
[7] 黄夏敏，彭中芳. 白芍在中成药生产过程中芍药苷含量变化的研究[J]. 中药新药与临床药理，1998，9（4）：236-237.
[8 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2005年版一部[M]. 北京：化学工业出版社，2005：68-69.