双孢菇三级菌种多以麦粒为原料，但在实际生产中发现污染率较高，或出现异常现象，导致生产计划难以落实，究其原因，就是菌种生产操作的不规范所致。针对双孢菇三级种的生产，笔者提出具体规范操作技术，供菇农朋友参考。
　　原料处理
　　牛粪破碎处理后过筛，按1:1.2加水拌匀，堆积发酵，每天翻堆一次，约20天左右，牛粪粉变为褐色、具有正常发酵草料的清香气味，晒干备用。未受潮的小麦，充分泡透后捞出，适当遮阳、通风，发现表皮发干时，轻喷细雾湿润，24 h后即可发芽，待麦芽长至1cm～2cm长时，即可使用。
　　如果有虫蛀麦粒，也可使用，但虫蛀后的麦粒有孔洞，淀粉易流出，所以，必须多清洗几遍。然后倒入pH值8～9的石灰水中，浸泡6h后煮20min左右，至麦粒无白心时，捞出麦粒，冷水冲洗后即可。
　　基本配方
　　麦粒(以干品计)100kg，牛粪粉30kg，石膏粉1kg，碳酸钙1.5kg。
　　基质混合
　　将麦粒与牛粪粉按1:0.2比例混合，并同时拌入其他辅料，注意使牛粪全部黏附到麦粒上，水分不足时适量喷水。剩余牛粪粉待用。
　　装瓶操作
　　一般小批量生产多不采用标准瓶，而利用酒瓶、葡萄糖玻璃瓶等，装瓶灭菌。为降低生产成本，可用500mL输液瓶。先装一把牛粪粉在瓶底，约1.0Cm～1.5cm厚，再装麦粒，装瓶时稍墩瓶，使麦粒至瓶肩以下1cm处，然后，再装入1把～2把牛粪粉，并用“L¨形工具将之摊平、压死，之后塞八棉塞。
　　灭菌冷却
　　采用高压灭菌方法，压力维持在O.15MPa，保持2.0h～2.5h。灭菌结束后，压力下降至O后，可取出料瓶，移入冷却室或接种室，室内提前3天清理干净，并喷洒百病傻溶液，至料瓶降温至30℃时即可接种。
　　接种操作
　　室内喷洒一遍赛百09溶液后，将原种用75％酒精擦洗1次，打开接种净化机，10min后即可开始接种操作。每瓶(500mL)原种可接40瓶以上。
　　发菌培养
　　培养室(棚)提前清理卫生，地面灌水，地毯式喷洒百病傻溶液，密闭2天后，地面撒施石灰粉，即可将接种后的菌种移入。发菌期间，尽量控制温度在25℃左右，不超过28℃，安装水温空调的最低可降至22℃左右。一般农户不具备条件，可采用土法降温：发菌棚内地面上用砖码起20cm高，铺上新塑料膜，将菌种瓶立式排入，灌入地下水，每天换水1次～2次，即可使菌瓶内保持25℃以下。每3天左右喷洒一次药物以作预防，可采用百病傻与赛百09交替，发现有菇蚊类成虫时，随即喷施高效氯氰菊酯予以杀灭。
　　剔杂处理
　　接种后第3天，即开始检查剔杂，发现任何非双孢菇菌丝的菌瓶，随即移出室外，有链孢霉污染的，应用方便袋从上往下套住菌瓶，慢慢移出。对一般杂菌的污染，可喷施药物后将料倒出，晒干后再次利用。对链孢霉污染，应远离培养室倒料，并予焚烧或深埋，空瓶用70℃以上热水烫杀，洗净后再用。
　　暂时保存
　　经35天～45天，菌种完成发菌，暂时不用的菌种，应予低温存放，一般保持2℃～4℃条件即可。
　　质量检验
　　双孢菇的菌丝浓白、清晰，生长有力，呈扇形生长，绒毛状菌丝多，整齐，气生菌丝洁白。现在采用最多的“2796”属半气生型品种，其菌丝旺盛、一致。没有黄白色厚菌被，菌丝浓白粗壮，遇高温时微黄、可出现少量束状菌丝，上下均匀一致。
　　瓶内菌丝生长不健壮、呈散乱状态，或有“退菌”、
　　“断菌”现象，料转色、结块或干缩，出现白色、浅黄色圆形块状物或不规则暗斑，有杂菌和螨类滋生，无蘑菇香味，具漂白粉或腥臭味等，均为不合格菌种。若菌丝呈淡黄白色，且菌丝萎缩，生长无力，或生长中就有菌被形成，则为培养基较湿或较老的菌种，菌种瓶内上部菌丝收缩变干，下部菌丝生长尚好，为培养基过干，培养温度过高；如果生长不均匀，表明麦粒浸泡和预煮时间不够，若生长中菌丝渐变黄，表明培养温度过高；若菌种瓶内上方出现很厚的菌被，是生产性能差或生理性状老化的菌种，不宜使用。一直在高温条件下培养的菌种，播种后不易吃料，发菌惺。