【摘 要】
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为构建表达HpaA蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,并探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体构建h.pylori疫苗株的意义,应用PCR法从H.pylori基因组DNA中扩增783bp的hpaA基因,经酶切-连
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为构建表达HpaA蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,并探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体构建h.pylori疫苗株的意义,应用PCR法从H.pylori基因组DNA中扩增783bp的hpaA基因,经酶切-连接反应将其克隆入原核表达质粒pTre99A的Nco I-Sal I位点,并进行了核苷酸序列测定.重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261,提取重组菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆.用SDS-PAGE电泳和Western blot进行HpaA表达分析和鉴定,用薄层扫描分析Hpa含量.重组菌C57BL/6小鼠喂灌,分批两d和10d后处死小鼠,取脾和末段回肠进行细菌培养,挑菌落提质粒鉴定.结果表明,经PCR和酶切证实,构建了含783bp hpaA基因的重组原核表达质粒,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌.重组菌能表达约30kD HpaA蛋白,重组HpaA量约占全菌体蛋白量的38.9%,Western blot证实其有免疫反应性.小鼠重组菌喂灌两d或10d后,脾和末段回肠均发现携目的基因的菌落.这些结果提示,构建了表达 H.pylori HpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,为制备以减毒鼠伤寒沙门氏菌为抗原释放系统的H.pylori 口服活疫苗进行了有益探索.
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