【摘 要】
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人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素.将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体
【机 构】
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中国科学院上海生物化学研究所,浙江大学应用昆虫学研究所
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人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素.将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO.将pBlueBacEPODNA与野生型BmNPV DNA共转染Bm细胞,经空斑纯化,获插入EPO cDNA的重组病毒rBmN-pVEFO.经Sonthem杂交和PCR扩增鉴定证明人EPO基因已正确组建于BmNPV的预定位置.将重组病毒rBmNPVEPO穿刺接种5龄幼虫和蛹,收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～6.5d蛹血淋巴.用ELISA检测幼虫血淋巴中EPO表达量高达62800u/mL,蛹血淋巴中表达量达74000u/mL.Western blot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带,分子量均约为26kD.用TF-l细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定,每毫升血淋巴中EPO活性约为63000u.
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