观察硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(NaHS)对蛛网膜下腔出血(SAH)后急性脑血管痉挛(CVS)的影响,并初步探讨其可能作用机制。
方法(1)48只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组、SAH组、NaHS低剂量组和NaHS高剂量组,每组12只。后3组采用视交叉池注血法制作SAH模型,后2组分别在造模后0.5 h腹腔注射0.7 mg/kg、2.8 mg/kg NaHS。造模后24 h进行Garcia神经功能评分,采用HE染色、TUNEL与免疫组化双标染色分别观察大鼠大脑前动脉(ACA)A2段血管近段形态、管壁厚度、管腔面积以及内皮细胞凋亡情况。(2)取培养好的胎鼠脑微血管内皮细胞分成4组:空白组、氧化血红蛋白(OxyHb,100 μmol/L)干预组、低剂量(25 μmol/L)NaHS预处理组、高剂量(100 μmol/L)NaHS预处理组。培养24 h后观察、统计脱皿内皮细胞数,并收集细胞采用Western blotting方法检测凋亡蛋白Caspase-3表达。
结果(1)SAH组大鼠神经功能评分[(8.5±2.4)分]较空白组显著下降,管壁厚度[(43.5±6.2) μm]显著增厚,管腔面积[(30 488±938) μm2]显著减小,TUNEL阳性细胞数[(36.51±11.45)%]显著增多,差异均有统计学意义(P<0.05);NaHS低剂量组、NaHS高剂量组神经功能评分[(11.6±1.9)分,(15.4±2.3)分]较SAH组显著升高,管壁厚度[(34.7±3.7) μm,(31.7±4.6) μm]显著减薄,管腔面积[(41 463±1104) μm2,(45 244±1217) μm2]显著增加,TUNEL阳性细胞数[(17.14±5.36)%,(8.10±4.62)%]显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05);NaHS高剂量组神经功能评分较NaHS低剂量组显著升高,TUNEL阳性细胞数显著下降,差异有统计学意义(P< 0.05)。(2)OxyHb干预组脱皿内皮细胞数[(40.56±9.85)%]较空白组显著增多,凋亡蛋白Caspase-3表达(0.395±0.122)明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05);低剂量NaHS预处理组、高剂量NaHS预处理组脱皿内皮细胞数[(16.65±6.35)%,(14.12±6.65)%]较OxyHb干预组显著减少,Caspase-3表达(0.223±0.083,0.208±0.104)显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论NaHS可有效缓解痉挛的脑血管,其保护作用可能是通过抑制脑血管内皮细胞凋亡实现的。