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摘要:目的:探究对丙肝患者使用ELISA方法对其血清中抗HCV进行测试的临床效果。
方法:选自我院2010年-2012年收治的丙肝患者共30例,以ELISA的方法对其血清当中抗HCV水平进行测试,将检测结果为阳性的标本再通过免疫胶体金试纸条对其进行检测,对比2种检测方法的一致性。
结果:所有患者接受ELISA方法进行检测之后血清结果均显示为阳性,使用胶体金吸附试验进行测试,有24例患者结果显示为阳性,阳性检出率明显低于ELISA方法,有统计学意义(P<0.05);ELISA法对抗原进行检测时浓度每升为1.25IU也能够将阳性标本检出。
结论:对丙肝患者的血清抗HCV使用ELISA法进行检测,不但灵敏度高,且特异性突出,操作简单方便,值得临床推广。
关键词:ELISA法丙肝血清中抗HCV
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2013)09-0160-01
随着人们生活节奏加快以及饮食结构变化,很多疾病均呈现出不断升高的趋势,其中丙型病毒性肝炎(丙肝)对人们的身体健康以及生活质量造成了严重的威胁,该病毒主要通过输血、肾移植、静脉注射毒品、血透析以及性传播等方式传染,临床主要表现为肝脏慢性炎性反应以及出现纤维化等。当HCV(丙肝病毒)进入到人体内之后会出现病毒血症的情况,在患者整个病程中会间断性的表现出来。在受到病毒感染后的第1周就可以使用PCR检测方法在患者的血液还有肝组织当中将HCV RNA检测出来;在第2周的时候则能够使用ELISA法对其抗HCV进行检测。为了更加深入的了解对丙肝患者使用ELISA法检测血清中抗HCV的临床效果,对我院2010年-2012年收治的丙肝患者临床资料进行分析。现总结如下。
1资料与方法
1.1一般资料。选自我院2010年-2012年收治的丙肝患者共30例。其中男性患者19例,女性患者11例;年龄最大的为50岁,年龄最小的为22岁,患者的平均年龄为38.6岁。另选同期本院体检结果显示为健康的正常人共30例,其中男性18例,女性12例;年龄最大的为48岁,年龄最小的为22岁,其平均年龄为38.3岁。
1.2检测试剂与仪器。本次研究试剂选择珠海丽珠生产的IgM检测试剂盒,其中共有96人份的酶标板,每升40Iu的标准品、塑料膜板盖、进行空白对照,标准品稀释缓冲液,底物A与B,终止液以及样品稀释液等。抗HCV金标试纸条则产自英科新创科技有限公司。本次研究所用仪器为美国伯乐1575洗板机、美国伯乐680酶标仪。
1.3检测方法。将本次研究对象的静脉血分离血清,以低温方式保存待检。ELISA法检测步骤主要如下:①在使用之前将所有试剂充分的混匀,注意不要产生泡沫;②将待测样品数量进行统计并以此确定酶标板的数量。每个标准品还有空白孔均需要做复孔。标本通过标本稀释液以1:1的比例稀释,然后在酶标板的反应孔内加入剂量为50uL的标本稀释液。通过棋盘法进行倍比稀释工作,标本浓度每升分别为20、10、5、2.5、0.1IU。然后使用上述方法对阴性血清进行稀释;③将完成稀释之后的标本品还有阴性血清(50uL)分别放入到反应孔里面,然后加入剂量为50uL的生物素标记抗体并将膜板盖上,振荡混匀后在温度为37℃的环境下孵育,时间为1小时;④将孔内液体甩去,在每孔当中将洗涤液加满并振荡30秒,将洗涤液甩去后用吸水纸拍干,连续操作5次;⑤在每个孔内加入剂量80uL的亲和链霉素-HRP振荡混匀后在温度为37℃的环境下孵育,时间为30分钟;⑥在每个孔内加入底物A与B,每样剂量均为50uL,振荡混匀后在温度为37℃的环境下孵育,时间为10分钟;⑦在波长为450nm的地方对各个孔内的OD值进行测试。将检测结果为阳性的标本再通过免疫胶体金试纸条对其进行检测。
1.4判定标准[1]。测定孔的OD数值与阴性对照孔的OD值比例超过2.1的判定为阳性,反之则为阴性。
1.5统计学处理。本次研究所有患者的临床资料均采用SPSS15.0统计学软件分析,计量资料采用均数加减标准差表示(X±S),计数资料用X2检验,组间对比采用X2检验,P<0.05为差异有显著性,有统计学意义。
2结果
所有患者接受ELISA方法进行检测之后血清结果均显示为阳性,使用胶体金吸附试验进行测试,有24例患者结果显示为阳性,阳性检出率明显低于ELISA方法,有统计学意义(P<0.05);ELISA法对抗原进行检测时浓度每升为1.25IU也能够将阳性标本检出。
3讨论
慢性丙肝是当前世界性医学的一道重要难题,其有着感染率高以及慢性化的特点,甚至会导致患者出现肝硬化以及肝癌等相关严重疾病。对丙肝患者HCV抗体使用ELISA方法进行检测本身具有简便快速的优点,经过了几个发展阶段,该检测方法已经趋向成熟。在本次研究中使用ELISA检测方法与胶体金吸附试验检测法进行对比,结果显示ELISA方法阳性检出率更具有优越性。当前临床对于丙肝初检大多数是使用胶体金抗HCV试纸,但是对复检则应该使用ELISA方法,这样更有保障性[2]。
综上所述,对丙肝患者的血清抗HCV使用ELISA法进行检测不但灵敏度高且特异性突出,操作简单方便,阳性检出率高,对丙肝患者的早期诊断具有重要意义,能够最大程度保障患者的治疗时机以及生活质量,值得臨床推广。
参考文献
[1]徐晓宏,王伟娟.ELISA法与胶体金法检测HCV抗体特异性比较[J].齐齐哈尔医学院学报.2012,11(24):254-255
[2]罗媛烨,杨海燕.丙肝抗体阳性者血清中HCV抗原的检测[J].实验与检验医学.2011,14(03):146-147
方法:选自我院2010年-2012年收治的丙肝患者共30例,以ELISA的方法对其血清当中抗HCV水平进行测试,将检测结果为阳性的标本再通过免疫胶体金试纸条对其进行检测,对比2种检测方法的一致性。
结果:所有患者接受ELISA方法进行检测之后血清结果均显示为阳性,使用胶体金吸附试验进行测试,有24例患者结果显示为阳性,阳性检出率明显低于ELISA方法,有统计学意义(P<0.05);ELISA法对抗原进行检测时浓度每升为1.25IU也能够将阳性标本检出。
结论:对丙肝患者的血清抗HCV使用ELISA法进行检测,不但灵敏度高,且特异性突出,操作简单方便,值得临床推广。
关键词:ELISA法丙肝血清中抗HCV
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2013)09-0160-01
随着人们生活节奏加快以及饮食结构变化,很多疾病均呈现出不断升高的趋势,其中丙型病毒性肝炎(丙肝)对人们的身体健康以及生活质量造成了严重的威胁,该病毒主要通过输血、肾移植、静脉注射毒品、血透析以及性传播等方式传染,临床主要表现为肝脏慢性炎性反应以及出现纤维化等。当HCV(丙肝病毒)进入到人体内之后会出现病毒血症的情况,在患者整个病程中会间断性的表现出来。在受到病毒感染后的第1周就可以使用PCR检测方法在患者的血液还有肝组织当中将HCV RNA检测出来;在第2周的时候则能够使用ELISA法对其抗HCV进行检测。为了更加深入的了解对丙肝患者使用ELISA法检测血清中抗HCV的临床效果,对我院2010年-2012年收治的丙肝患者临床资料进行分析。现总结如下。
1资料与方法
1.1一般资料。选自我院2010年-2012年收治的丙肝患者共30例。其中男性患者19例,女性患者11例;年龄最大的为50岁,年龄最小的为22岁,患者的平均年龄为38.6岁。另选同期本院体检结果显示为健康的正常人共30例,其中男性18例,女性12例;年龄最大的为48岁,年龄最小的为22岁,其平均年龄为38.3岁。
1.2检测试剂与仪器。本次研究试剂选择珠海丽珠生产的IgM检测试剂盒,其中共有96人份的酶标板,每升40Iu的标准品、塑料膜板盖、进行空白对照,标准品稀释缓冲液,底物A与B,终止液以及样品稀释液等。抗HCV金标试纸条则产自英科新创科技有限公司。本次研究所用仪器为美国伯乐1575洗板机、美国伯乐680酶标仪。
1.3检测方法。将本次研究对象的静脉血分离血清,以低温方式保存待检。ELISA法检测步骤主要如下:①在使用之前将所有试剂充分的混匀,注意不要产生泡沫;②将待测样品数量进行统计并以此确定酶标板的数量。每个标准品还有空白孔均需要做复孔。标本通过标本稀释液以1:1的比例稀释,然后在酶标板的反应孔内加入剂量为50uL的标本稀释液。通过棋盘法进行倍比稀释工作,标本浓度每升分别为20、10、5、2.5、0.1IU。然后使用上述方法对阴性血清进行稀释;③将完成稀释之后的标本品还有阴性血清(50uL)分别放入到反应孔里面,然后加入剂量为50uL的生物素标记抗体并将膜板盖上,振荡混匀后在温度为37℃的环境下孵育,时间为1小时;④将孔内液体甩去,在每孔当中将洗涤液加满并振荡30秒,将洗涤液甩去后用吸水纸拍干,连续操作5次;⑤在每个孔内加入剂量80uL的亲和链霉素-HRP振荡混匀后在温度为37℃的环境下孵育,时间为30分钟;⑥在每个孔内加入底物A与B,每样剂量均为50uL,振荡混匀后在温度为37℃的环境下孵育,时间为10分钟;⑦在波长为450nm的地方对各个孔内的OD值进行测试。将检测结果为阳性的标本再通过免疫胶体金试纸条对其进行检测。
1.4判定标准[1]。测定孔的OD数值与阴性对照孔的OD值比例超过2.1的判定为阳性,反之则为阴性。
1.5统计学处理。本次研究所有患者的临床资料均采用SPSS15.0统计学软件分析,计量资料采用均数加减标准差表示(X±S),计数资料用X2检验,组间对比采用X2检验,P<0.05为差异有显著性,有统计学意义。
2结果
所有患者接受ELISA方法进行检测之后血清结果均显示为阳性,使用胶体金吸附试验进行测试,有24例患者结果显示为阳性,阳性检出率明显低于ELISA方法,有统计学意义(P<0.05);ELISA法对抗原进行检测时浓度每升为1.25IU也能够将阳性标本检出。
3讨论
慢性丙肝是当前世界性医学的一道重要难题,其有着感染率高以及慢性化的特点,甚至会导致患者出现肝硬化以及肝癌等相关严重疾病。对丙肝患者HCV抗体使用ELISA方法进行检测本身具有简便快速的优点,经过了几个发展阶段,该检测方法已经趋向成熟。在本次研究中使用ELISA检测方法与胶体金吸附试验检测法进行对比,结果显示ELISA方法阳性检出率更具有优越性。当前临床对于丙肝初检大多数是使用胶体金抗HCV试纸,但是对复检则应该使用ELISA方法,这样更有保障性[2]。
综上所述,对丙肝患者的血清抗HCV使用ELISA法进行检测不但灵敏度高且特异性突出,操作简单方便,阳性检出率高,对丙肝患者的早期诊断具有重要意义,能够最大程度保障患者的治疗时机以及生活质量,值得臨床推广。
参考文献
[1]徐晓宏,王伟娟.ELISA法与胶体金法检测HCV抗体特异性比较[J].齐齐哈尔医学院学报.2012,11(24):254-255
[2]罗媛烨,杨海燕.丙肝抗体阳性者血清中HCV抗原的检测[J].实验与检验医学.2011,14(03):146-147