【摘 要】
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根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia
【机 构】
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中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林大学畜牧兽医学院
【基金项目】
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国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAD55B05)
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根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VP1 Asia)。然后,将VP1 Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VP1 Asia,接着将其转入BL21菌中进行原核表达。以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清。结果显示,VP1 Asia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VP1Asia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法。以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0%(27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29)。本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
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