【摘 要】
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犬细小病毒（Canine parvovirus, CPV）、犬冠状病毒（Canine coronavirus, CCoV）和犬轮状病毒（Canine rotavirus, CRV）是引起犬腹泻的主要病原.3种病原引发的疾病临床症状相似，难以诊断，因此需要建立可以高效鉴别这3种病原的分子检测方法.通过对引物浓度、退火温度的条件优化，建立了可同时检测CPV、CCoV和CRV 3种病毒的三重PCR方法，
【基金项目】
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四川省科技厅项目（2019YFN0133）； 西南民族大学中央高校基本科研业务费专项（ZYN2023046）；
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犬细小病毒（Canine parvovirus, CPV）、犬冠状病毒（Canine coronavirus, CCoV）和犬轮状病毒（Canine rotavirus, CRV）是引起犬腹泻的主要病原.3种病原引发的疾病临床症状相似，难以诊断，因此需要建立可以高效鉴别这3种病原的分子检测方法.通过对引物浓度、退火温度的条件优化，建立了可同时检测CPV、CCoV和CRV 3种病毒的三重PCR方法，并进行特异性、敏感性和重复性试验.结果显示，该方法可特异性扩增CPV VP2基因（253 bp）、CCoV ORF-1b基因（379 bp）和CRV VP6基因（852 bp）的目的片段，未检出其他相关病原；对CPV、CCoV和CRV的最低检测浓度分别为6.44×10-1 pg/μL、8.72×10-1 pg/μL和8.35×10-1 pg/μL,方法的灵敏度高；重复性试验显示该方法具有良好的稳定性.应用建立的三重PCR方法对2019～2020年成都市区采集的135份犬腹泻粪便样本进行了检测，并与单重PCR检测结果相比较.结果显示CPV、CCoV和CRV的检出率分别为16.30%、20.74%和4.44%;总感染率为51.11%（65/135）),其中多病原混合感染率为20.00%（13/65）,检测结果与单重PCR相符.建立的三重PCR方法，可以用于相关病原的临床检测和流行病学调查.
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